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补体第三组分(The third complement component, C3)是血清中含量最为丰富的补体蛋白,功能上处于经典途径、甘露糖凝集素途径和旁路途径三条激活途径的启动汇合位置,被视为补体系统的核心分子,是连接天然免疫和适应性免疫的桥梁,在免疫防御、调控、病理中均发挥重要作用。在抗原抗体复合物或病原体的刺激下,通过级联反应,活化补体C3,随后在靶细胞表面形成膜攻击复合体,最终达到裂解靶细胞的目的。另外,补体C3分子及其裂解产物还有一系列调节免疫系统的功能。总体来说,补体C3分子在先天性免疫和适应性免疫系统中,都起着重要的作用。七鳃鳗作为稀有的无颌类脊椎动物的代表,进化地位处于无脊椎动物与脊椎动物之间,其独特的进化地位及可变淋巴受体VLR介导的特殊的适应性免疫系统受到免疫学家的关注。曾有报道称七鳃鳗补体C3分子由三条链β、α、γ组成,但是,其一致性与哺乳类动物补体C3分子相比不到40%,关于七鳃鳗体内的补体C3相关的免疫学功能,也尚不明确,且七鳃鳗体内是否存在其他补体分子也是未知,由此,对于七鳃鳗是否存在真正意义的补体系统有诸多疑点。为了研究所谓的七鳃鳗体内的补体C3分子是否等同于传统哺乳动物意义上的C3分子及其相关的免疫学功能特点,我们进行了类日本七鳃鳗(Lampetra japonica)补体C3(L-C3-like)分子开放阅读框全长及3’非编码区的基因cDNA克隆,获得全序列6274bp,其中开放阅读框全长5013bp,编码1671个氨基酸,针对前人命名的α链与γ链的连接区域设计引物扩增获得L-C3-like-2、经原核表达及蛋白纯化,纯化后的重组蛋白经质谱鉴定表达无误,进一步进行抗七鳃鳗补体L-C3-like-2的兔多克隆抗体的制备,利用自行制备的多克隆抗体对天然L-C3-like分子进行相关的免疫学研究,激光共聚焦实验对七鳃鳗L-C3-like分子进行亚细胞定位,流式细胞术方法检测到L-C3-like分子在免疫小体细胞中有表达,Real-time PCR和Western blot分别在转录水平和蛋白水平显示各组织的蛋白表达情况。免疫共沉淀证实L-C3-like分子与VLRB存在相互作用关系,血清学检测及靶细胞沉积实验印证L-C3-like功能。本论文通过对七鳃鳗抗补体L-C3-like-2多克隆抗体的成功制备为相关免疫学功能的研究奠定基础,重新揭开最低等脊椎动物先天性及适应性免疫系统的研究篇章,为解决其起源与进化的谜团提供重要线索。