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放氧复合体(Oxygen-evolvingcomplex；OEC)是叶绿体光系统Ⅱ的一个复合体，位于类囊体膜的腔内侧，是叶绿体光反应过程中氧化水分子释放出氧气所不可缺少的。OEC是由三个已确定的表观分子量为33kDa、23kDa和16kDa(编码的基因分别为：psbO，psbP和psbQ)的多肽及一些还未确定的分子量更小的多肽组成。植物病毒学的新近研究结果表明OEC的多肽与病毒侵染后的症状表达有密切关系。本实验以本生烟(Nicotiana.benzhamiana)为试材，采用RT-PCR方法，克隆了编码OEC的三个主要多肽的cDNA核苷酸序列。其中，33kDa蛋白的cDNA序列与Genbank中登录号为AY220076(编码普通烟N.tabacum的OEC33kDa蛋白)的同源性最高，为98.76％，推导的氨基酸序列的同源性为99.10％；23kDa蛋白的cDNA序列与Genbank中登录号为X55354(编码普通烟N.tabacum的OEC23kDa蛋白)的同源性最高，为92.91％，cDNA的编码序列同源性为97.07％，非同源的核苷酸主要位于3’端非翻译区，推导的氨基酸序列的同源性为96.93％；16kDa蛋白的cDNA序列与Genbank中登录号为AY568719(番茄中16kDa蛋白的cDNA序列)的序列同源性最高，为89.4％，推导的氨基酸序列也与AY568719编码的序列同源性最高，为88.6％。同时也克隆了普通烟中16kDa蛋白的cDNA序列，与AY568719的同源性最高，为89.7％，推导的氨基酸序列同源性为88.6％。从普通烟与本生烟叶片中测得的核苷酸序列与编码的氨基酸序列之间的同源性分别为98.6％和99.6％(见图2.10及2.11)。这是最先测得的烟草OEC16kDa蛋白亚基的cDNA序列。以上测得的序列已登录到GenBank，获得的序列号分别为AY952375，AY952374，AY887536(本生烟中33kDa，23kDa和16kDa的cDNA序列)和AY887537(普通烟中16kDa的cDNA序列)。
将克隆到的OEC三种蛋白亚基的成熟肽的cDNA编码区进行亚克隆，与原核表达载体pET22b(+)连接。获得的重组子转化大肠杆菌BL21(DE3)后，用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE和Westernblot分析表明，三种蛋白分别在大肠杆菌中得到了高效表达。采用金属Ni2+螯合层析方法及切胶回收的方法将融合蛋白纯化后免疫兔子，获得了特异性较高的抗血清。ACP-ELISA方法测定效价分别为1/214，1/213和1/214。
利用已制备的抗血清，测定了烟草花叶病毒侵染本生烟(N.benthamiana)和普通烟(N.tabacum)后上述三种蛋白的表达变化。烟草花叶病毒侵染本生烟表现症状为系统性叶片变小、向下卷曲，植株矮化，逐渐死亡；侵染普通烟(N.tabacum)表现出典型的系统性花叶症状。Westernblot分析结果表明，TMV侵染普通烟后，与对照相比，33kDa蛋白水平没有显著的变化，23kDa和16kDa蛋白水平显著降低。TMV侵染本生烟后，与对照相比，三种蛋白的表达量均没有显著的变化。以上OEC蛋白亚基表达差异可能与不同症状表现有关。
将33kDa蛋白的cDNA与植物表达载体p1301分别进行正反向连接，用农杆菌EHA105转化普通烟(N.tabacum)，获得33kDa蛋白的过量表达及抑制表达的转基因植株。并将OEC三种蛋白亚基部分cDNA序列与双生病毒载体连接，构建了引起基因沉默的重组病毒载体，为后续基因沉默的研究奠定了基础。