致病性猪链球菌安徽分离株的生物学特性研究

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猪链球菌病是链球菌属中猪链球菌(Streptococcus suis,S.suis)、马链球菌兽疫亚种、马链球菌类马亚种以及Lancefield分群中D、E、L群链球菌引致猪的疫病的总称,临床上主要表现为淋巴结脓肿、脑膜炎、关节炎、心内膜炎以及败血症等症状。S.suis是世界范围内引致猪链球菌病最主要的病原。S.suis的生物学特性具有地域性差异。根据荚膜多糖可将S.suis分为35个血清型,即1型~34型和1/2型。其中1型、2型、7型和9型对猪的致病性较强,猪2型链球菌(Streptococcus suis serotype2, S.suis2)在世界范围内流行最广。本研究针对安徽地区49株致病性猪链球菌的血清型和毒力基因型分布、致病性、耐药性等相关生物学特性进行检测分析。通过观察菌落生长特征、革兰氏染色镜检,初步研究安徽地区S.suis的形态及培养特性和溶血性。49株S.suis中46株菌形态、染色、培养特征符合S.suis的特点,3株菌在血平板上呈现出与其他菌株不同的形态特征;49株S.suis在兔血平板上21株呈现溶血,20株呈不典型β溶血,7株β溶血,1株呈γ溶血。采用microELISA法对19株S.suis2的溶血价测定,结果显示溶血、不典型β溶血和β溶血的菌株溶血价分别在在1:8~1:32,1:4~1:32,1:64~1:128之间。表明不同S.suis在兔血平板上的溶血类型可能不同,β溶血的S.suis2菌株的溶血价明显高于溶血、不典型β溶血。利用PCR分型方法对49株猪链球菌进行主要流行血清型1、2、7、9型分型鉴定。其中猪2型链球菌19株,猪1型链球菌8株,猪7型链球菌7株,分别占38.8%,16.3%,14.3%,没有检测出猪9型链球菌。表明安徽省S.suis感染存在多种血清型,其中S.suis2为优势血清型。根据文献合成mrp、epf、sly三种毒力因子基因的引物,通过PCR检测表明,49株猪链球菌中36.7%为mrp+,38.8%为epf+,71.4%为sly+。PCR扩增S.suis2毒力基因cps2J、mrp、epf和sly,对这4种毒力基因的扩增片段进行序列测定,并与国内外其他分离株的基因序列进行比较。分析发现,57.9%(11/19)S.suis2菌株的毒力基因型为cps2J+/mrp+/epf+/sly+,为优势基因型;S.suis2安徽分离株cps2J、mrp、epf和sly基因部分序列之间及其与国内外其他地区S.suis2分离株间的同源性分别在98.3%以上、99.2%以上、87.8%以上和99.0%以上。表明安徽省猪群中流行的S.suis2毒力基因的分布特征与国内外报道的相似,CPS、MRP、EPF和SLY是安徽省流行的S.suis2的重要毒力因子。采用Kirby-Bauer纸片琼脂扩散法检测49株S.suis对25种临床常用药物的敏感性。安徽地区猪链球菌分离株普遍对阿莫西林、氨苄西林、利福平和先锋霉素V等敏感,敏感率分别为95.92%、93.88%、85.71%、81.63%;对杆菌肽和四环素的耐药率较高,分别达到87.76%、85.71%。所有菌株均有多重耐药性,耐3~9种抗生素的占36.7%,耐10~19种抗生素的占53.0%,耐20~24种抗生素的占8.1%,耐25种抗生素的占2.0%,多重耐药谱为杆菌肽-四环素-强力霉素-磺胺甲噁唑。表明安徽省临床分离的致病性猪链球菌的耐药程度非常严重。按寇氏法测定5株S.suis2菌株的半数致死量(LD50)。发现具有β溶血,较高溶血价(1:64)及毒力基因型为mrp+/epf+/sly+的菌株HJ17毒力最高(LD50为1.38×107CFU)。表明S.suis2菌株毒力因其溶血性及其所携带的毒力因子的不同而有差异。
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