蛋氨酸脑啡肽对人宫颈永生化H8细胞生长的抑制作用

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目的:宫颈鳞状上皮内病变(Squamous Intraepithelial Lesion,SIL)是育龄期妇女常见疾病,近年来在世界范围内其发病率正在增加。根据宫颈鳞状上皮内病变诊疗指南,低级别宫颈鳞状上皮内病变(Low-grade Squamous Intraepithelial Lesion,LSIL)可选择随访或手术治疗,对于高级别宫颈鳞状上皮内病变(High-grade Squamous Intraepithelial Lesion,HSIL)手术是其主要治疗方法。但是,手术会带来多种问题,例如术后流产和心理压力。如果有药物可以治愈宫颈鳞状上皮内病变,将大大减少手术对患者的创伤。宫颈永生化上皮H8细胞(以下简称H8细胞)是HPV16永生化的宫颈鳞状上皮细胞株,即相当于临床的宫颈上皮内瘤变(类似于CINII-III)。本文的目的是研究蛋氨酸脑啡肽(Methionine-enkephalin,MENK)对H8细胞生长的抑制作用。方法:体外培养宫颈永生化H8细胞,将H8细胞用不同浓度的MENK处理不同的时间。通过MTS分析和流式细胞仪评估细胞活力,选择最佳作用浓度和作用时间,并在常规光学显微镜下观察形态变化;用流式细胞术测定MENK作用H8细胞后细胞的周期变化;RT-qPCR检测阿片生长因子受体(Opioid growth factor,OGFr)的mRNA表达水平;用流式细胞术测定MENK作用H8细胞后细胞的凋亡情况;酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,Elisa)法测定给药前后H8细胞中转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β,TGF-β1)含量,免疫荧光法确定OGFr在细胞内的位置及给药后的表达情况;结果:MENK通过OGFr抑制H8细胞。研究的结果表明MENK可以显著调节H8细胞的增殖。将细胞周期停滞在G0/G1期,降低S和G2/M期的细胞百分比,并显著促进H8细胞凋亡。逆转录-定量聚合酶链反应表明,MENK处理后,H8细胞增加了OGFr的表达。另外,用MENK处理不同时间后,MENK组中TGF-β1的表达水平均高于对照组。结论:本研究结果首次证明MENK可以抑制H8细胞的生长,诱导H8细胞凋亡,其潜在机制可能与OGFr受体以及TGF-β1的表达有关。MENK可能成为治疗宫颈上皮内瘤变的一种有效药物。
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