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侧柏叶是一种传统的中药材,而且是被国家食品药品监督管理总局批准的可用于保健食品的物品名单之一。本论文以侧柏叶为原料,分别分离纯化出侧柏叶黄酮POF、侧柏叶多糖POP1和侧柏叶多糖POP2,分别对其进行结构表征和分析,并分别用不同的细胞模型评估了它们的生物活性,即POF的抗炎活性、POP1的免疫促进活性和抗乙肝病毒活性、POP2对巨噬细胞极化的调节作用。采用大孔吸附树脂纯化侧柏叶黄酮,研究了6种树脂(NKA-9、ADS-F8、ADS-17、AB-8、D101和ADS-5)对侧柏叶黄酮的吸附率和解吸率,筛选出的树脂型号为AB-8树脂。研究了AB-8树脂的静态吸附动力学和静态解吸动力学规律。吸附等温线试验表明,当吸附平衡浓度高于0.10 mg/mL时,温度越低,对AB-8树脂吸附侧柏叶黄酮越有利。采用柱层析纯化侧柏叶黄酮,上样浓度为0.60 mg/mL(总黄酮),上样量为2倍柱体积(200 mL),上样流速1.0 mL/min;洗脱液为体积分数为40%的乙醇溶液,洗脱液流速为1.0 mL/min,洗脱体积为2倍柱体积。通过紫外-可见全波长扫描、红外光谱和液相色谱-质谱联用分析了侧柏叶黄酮的结构特征。基于LC-MS分析,鉴定出8种黄酮类化合物:黄细心酮B(Boeravinone B)、秦皮甲素(Esculin)、穗花杉双黄酮(Amentoflavone)、光甘草定(Glabridin)、Afromosin、Sophoracoumestan B、Licoflavanone和Rivularin 2′-O-glucuronide。利用热重-差示扫描量热(STA/TG-DSC)分析了侧柏叶黄酮FOF的热稳定性,POF的热降解过程分为4个阶段,热分解焓变峰的温度分别为347.6°C、437.5°C、494.8°C。以LPS诱导的小鼠巨噬细胞RAW 264.7为模型研究了侧柏叶黄酮POF的抗炎活性,POF在25~400μg/mL的浓度范围内能显著抑制巨噬细胞炎症因子NO、IL-6和TNF-α的分泌,并且POF对巨噬细胞的增殖无明显毒性。采用“热水浸提-去蛋白-醇沉-阴离子交换树脂柱层析-凝胶渗透过滤柱层析-透析-真空冷冻干燥”工艺分离纯化出侧柏叶多糖POP1(去离子水洗脱组分)和POP2(0.05M NaCl洗脱组分)。侧柏叶多糖POP1的平均分子量为8.10×103 Da;单糖组成分析得出各单糖的摩尔百分比分别为:葡萄糖(64.96%)、阿拉伯糖(12.58%)、甘露糖(10.97%)、半乳糖(6.55%)、鼠李糖(5.74%)。再综合高碘酸氧化、甲基化分析及核磁共振分析,得出POP1的糖苷键组成为:(1→5)-linkedα-L-Ara、(1→3)-linkedα-L-Man、(1→6)-linkedβ-L-Rha、(1→4)-linkedα-D-Glc、(1→6)-linkedα-D-Glc、(1→6)-linkedβ-D-Gal、(1→3,6)-linkedβ-D-Gal,末端残基为α-L-Man和α-D-Glc。热重-差示扫描量热分析表明POP1具有良好的热稳定性,玻璃化转变温度为57.0oC,热分解焓变峰的温度为322.9oC。细胞实验证明,POP1具有良好的免疫活性,在62.5~1000μg/mL的浓度范围内能显著促进小鼠巨噬细胞RAW 264.7分泌细胞因子NO、TNF-α、IL-6和IL-12,并且呈现较明显的剂量效应关系;另外IL-6 mRNA、TNF-αmRNA、iNOS mRNA的表达量也显著增加。POP1还具有良好的抗乙肝病毒活性,能够有效地抑制乙肝病毒抗原HBs Ag(IC50=1.33±0.12 mg/mL)和HBeAg(IC50=1.67±0.13 mg/mL)的分泌,并且抑制HBV DNA的复制(IC50=0.80±0.03 mg/mL)。侧柏叶多糖POP2的平均分子量为9.69×103 Da,单糖组成分析得出POP2的各单糖的摩尔百分比为:葡萄糖(63.95%)、阿拉伯糖(14.39%)、半乳糖(11.42%)、甘露糖(10.24%)。基于单糖组成分析、甲基化分析及核磁共振波谱分析,得出POP2的糖苷键主要由(1→4)-linkedα-D-Glc组成,其次为(1→6)-linkedα-D-Glc,其余为(1→5)-linkedα-L-Ara、(1→6)-linkedβ-D-Gal,以及末端残基α-L-Man和α-D-Glc。分别用LPS和IL-4诱导小鼠巨噬细胞RAW 264.7,对比分析了LPS或IL-4诱导前后细胞形态学变化及膜表面分子受体CD16/32和Dectin-1表达率的变化,以分别建立M1极化模型和M2极化模型。以IL-6、TNF-α和iNOS的mRNA的表达量为评价指标,得出巨噬细胞M1极化适宜的条件为:诱导剂LPS的浓度为1.0μg/mL,诱导时间为8 h。以ARG1和MCP-1的mRNA的表达量为评价指标,得出巨噬细胞M2极化适宜的条件为:诱导剂IL-4的浓度为20 ng/mL,诱导时间为8 h。POP2对LPS诱导的M1极化巨噬细胞分泌细胞因子的影响为:POP2在31.25~500μg/mL的浓度范围内,能显著抑制NO的分泌,促进IL-6、IL-10和TNF-α的分泌。POP2对IL-4诱导的M2极化巨噬细胞分泌细胞因子的影响为:POP2在31.25~500μg/mL的浓度范围内,能显著增加NO、IL-6和TNF-α的分泌,抑制TGF-β的分泌。这些结果表明,POP2对巨噬细胞极化具有双向调节作用,即能够调节巨噬细胞炎症因子和抗炎因子分泌的平衡。