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目的:
Th17细胞及其细胞因子IL-17在自身免疫性炎性肠病的发病过程中发挥关键作用，但其具体的效应机制尚不十分清楚。在炎症环境中，IL-17介导的炎症反应常与其它炎症介质（如细菌脂多糖，LPS）引发的反应伴随存在，因此有必要探讨IL-17与其它炎症介质联合作用。IL-17的效应机制如何，通过什么样的机制与其它的炎症介质发挥联合作用是目前尚不清楚的课题。基于上述背景，我们首先探讨IL-17细胞因子在TNBS诱导的炎性肠病动物模型中的表达变化;其次以HT-29结肠癌上皮细胞系为模型，研究IL-17与脂多糖(LPS)在结肠上皮细胞中的效应机制，为以IL-17为靶点的炎性肠病干预策略提供新的理论及实验依据。
方法:
第一:探讨IL-17/IL-17R在炎性肠病中的表达变化。通过建立TNBS炎性肠病模型，采用嗜热菌蛋白酶分离法，进行小鼠结直肠上皮细胞的分离，提取肠上皮细胞总RNA，通过Real-time PCR方法检测IL-17及其受体在TNBS炎性肠病模型中的表达变化;
第二:以人肠上皮细胞---HT-29细胞为模型，观察IL-17与细菌脂多糖LPS协同促进肠上皮细胞活化，介导免疫损伤的分子机制。
首先通过流式细胞仪分离技术(FACS)检测IL-17RA、TLR-4在HT-29细胞中的表达，在此基础上观察IL-17和不同剂量LPS干预人肠上皮细胞（HT-29细胞）;以及为探讨IL-17与不同浓度LPS共同在HT-29细胞中的效应，通过酶联免疫吸附(ELISA)方法，检测细胞因子IL-8的表达;其次为探讨IL-17协同LPS促进HT-29细胞活化的信号传导机制，我们通过Western Blot技术，观察IL-17与LPS联合干预人肠上皮细胞(HT-29细胞)后细胞内PI3K-AKT、NF-κ B、MAPK通路的活化情况;再次在IL-17协同LPS通过PI3K-AKT、NF-κ B、MAPK通路促进HT-29细胞活化基础上，为探讨在自身免疫性炎性肠病发病过程中多种因子共同作用、相互影响体内微环境情况下细胞因子及趋化因子可能的效应.我们通过体外实验，利用Real-time PCR方法来观察hIL-17和LPS联合作用于HT-29细胞情况下中性粒细胞、Th17细胞、Th1细胞等趋化因子的变化;最后为进一步明确介导hIL-17和LPS在基因水平效应的具体细胞内信号机制，我们通过给予各信号通路抑制剂干预情况下，利用Real-time PCR方法观察hIL-17和LPS联合作用于HT-29细胞后趋化因子的变化。
结果:
第一:IL-17以及IL-17RAmRNA在TNBS诱导的炎性肠病动物模型中表达显著升高(P＜0.03);
第二:在以HT-29结肠上皮细胞模型中，首先我们实验发现HT-29细胞高表达IL-17RA，以及TLR4分子，在此基础上我们发现静息状态下HT-29细胞表达IL-8的水平低，LPS刺激(10 ng/mL)6h后肠上皮细胞开始表达IL-8，第12 h时IL-8的表达显著增加(与第6h时相比，P＜0.01)，第24h达高峰(与第12 h时相比，P＜0.01)，而IL-17单独作用于HT-29细胞表达IL-8的水平低;其次我们研究发现IL-17能与低浓度的LPS协同促进IL-8的表达(2187.61±132.42 vs2634.27±134.63，P=0.01)，但随着LPS剂量升高，LPS本身诱导IL-8表达的活性降低，且与IL-17的协同作用消失(1841.43±50.38 vs1685.67±71.47，P=0.01);研究IL-17与低浓度LPS联合作用的细胞内信号机制，发现是通过增强NF-κ B、PI3K-AKT、MAPK信号通路的活化，促进炎症反应.再次，我们研究IL-17和LPS作用于HT-29细胞情况下趋化因子的变化，发现IL-17单独效应弱，两者协同促进中性粒相关趋化因子(包括CXCL-1、CXCL-2，CXCL-5，CXCL-6，CXCL-8)和Th17细胞趋化因子CCL-20mRNA的表达;最后我们探讨介导其趋化因子变化的具体细胞内信号机制，发现中性粒相关趋化因子表达是通过NF-κ B、PI3k、MAPK途径介导的，只是不同通路作用的程度不同;对于Th17细胞趋化因子的表达是通过NF-κB、MAPK途径介导活化的，而PI3k通路介导抑制;IL-17拮抗LPS诱导的Th1细胞因子的表达，是由PI3k、ERK介导的，而NF-κ B、P38起相反作用。
结论:
①IL-17参与炎性肠病的免疫损伤过程。
②IL-17与低浓度的LPS协同作用于HT-29细胞，通过NF-κ B、MAPK通路，促进中性粒细胞、Th17细胞的募集和活化，促使炎症反应扩大，最终导致免疫损伤。
③IL-17在HT-29细胞中通过ERK和PI3K通路，抑制或延缓Th1细胞的募集和活化，提示Th1和Th17不同细胞亚群存在相互拮抗效应。