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本文选用5-6周龄雌性昆明小鼠的未成熟和成熟卵母细胞,将其在不同冷冻前处理液中平衡5min,然后在冷冻溶液中平衡30s后进行OPS法和SSV法玻璃化冷冻保存,观察解冻后培养的卵母细胞的体外发育率,以期对两种玻璃化冷冻保存技术进行比较研究。试验结果如下:
小鼠未成熟卵母细胞的OPS法冷冻保存中,用EFS冷冻的卵母细胞解冻后形态正常率最高为84.4%,成熟率低于16.7%;在EDFS30中冷冻保存,解冻后形态正常率最高为90.5%,成熟率为22.5%;在EDFS40中冷冻保存,解冻后形态正常率最高为91.9%,成熟率为40.5%,与对照组(96.4%和77.0%)差异极显著(p<0.01)。
小鼠未成熟卵母细胞的SSV法冷冻保存中,用EFS冷冻的卵母细胞解冻后形态正常率最高为86.0%,成熟率为46.5%;在EDFS30中冷冻保存,解冻后形态正常率最高为92.3%,成熟率为57.2%;在EDFS40中冷冻保存,解冻后形态正常率最高为90.1%,成熟率为48.4%,与对照组(96.4%和77.0%)差异极显著(p<0.01)。
小鼠成熟卵母细胞的OPS法冷冻保存中,用EFS冷冻的卵母细胞解冻后形态正常率最高为75.8%,激活后卵裂率为47.8%;在EDFS30中冷冻保存,解冻后形态正常率最高为87.2%,卵裂率为62.0%;在EDFS40中冷冻保存,解冻后形态正常率最高为86.6%,卵裂率为57.4%,与对照组(99.0%和80.5%)差异极显著(p<0.01)。
小鼠成熟卵母细胞的SSV法冷冻保存中,用EFS冷冻的卵母细胞解冻后形态正常率最高为82.7%,卵裂率为47.1%;在EDFS30中冷冻保存,解冻后形态正常率最高为91.5%,卵裂率为57.5%;在EDFS40中冷冻保存,解冻后形态正常率最高为85.1%,卵裂率为55.9%,与对照组(99.0%和80.5%)差异极显著(p<0.01)。
EG和DMSO组合的EDFS玻璃化冷冻液对小鼠的未成熟卵母细胞和成熟卵母细胞冷冻后的形态正常率最高分别为92.8%和90.7%,与对照组间差异不显著(p>0.01)。以上试验中,无论是未成熟卵母细胞还是成熟卵母细胞,解冻后的发育潜力都表明EDFS冷冻液冷冻保存的效果好于EFS。
OPS法和SSV法冷冻小鼠未成熟卵母细胞的冻后形态正常率为91.6%和91.4%,与对照组间差异较显著(p>0.01);成熟率为42.9%和59.1%,与对照组差异极显著(p<0.01)。OPS法和SSV法冷冻小鼠成熟卵母细胞的冻后形态正常率为86.5%和91.6%,卵裂率为53.8%和55.6%,与对照组差异均极显著(p<0.01)。
OPS法可以有效地冷冻保存小鼠未成熟卵母细胞,且新型玻璃化冷冻法SSV法冷冻保存小鼠未成熟卵母细胞效果优于OPS法,冷冻保存小鼠成熟卵母细胞效果也较好,可以被推广使用。