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第一章:对核酸适配体的筛选技术和特点、毛细管电泳法和荧光分析法作了简要介绍,阐述了本论文的立题背景,所研究的主要内容和创新点。第二章:我们采用四甲基罗丹明(TMR)标记的含有29个碱基的适配体作为探针,详细研究了采用激光诱导荧光毛细管电泳法(CE-LIF)检测凝血酶体系当中,样品缓冲液中的金属离子(如Na+,Mg2+和K+)对适配体-凝血酶复合物峰面积的影响,并且在优化的条件下,实现了凝血酶的灵敏检测,检出限为0.1 nM,本方法具有很好的选择性,并且可以实现复杂基质中凝血酶的定量检测。第三章:我们建立了TMR标记的适配体作为亲和探针的CE-LIF检测人中性粒细胞弹性蛋白酶(HNE)的方法。在CE-LIF分析中,HNE-适配体复合物与未结合的适配体探针可以很好的分离。我们在HNE适配体的不同位点上修饰单个TMR染料,修饰位点包括5’末端,3’末端或适配体内部的T碱基。实验发现,在第40个T碱基上标记有TMR的适配体形成了较大的复合物峰。同时,我们研究了样品缓冲液中金属阳离子对CE-LIF检测HNE的影响。高浓度的K+或Na+引起复合物峰面积的减少,而Mg2+的添加显著降低了复合物的峰面积。在优化的条件下,我们实现了0.5nM HNE的检测。该方法能够检测稀释的人血清样品中的HNE。另外,我们还探讨了两个复合物峰中HNE和适配体的比例。第四章:我们介绍了一种在具有15个碱基的凝血酶适配体(Apt15)末端添加T碱基来增强其亲和力的方法。在CE-LIF分析人α-凝血酶的过程中,可以形成稳定的适配体-凝血酶复合物。在Apt15的3’末端连接至少18个T碱基会显著提高适配体的亲和力。当Apt15部分与α-凝血酶结合时,添加的T碱基和α-凝血酶之间也发生了相互作用,由于这些双重相互作用导致适配体的亲和力显著增强。使用带有25个T碱基的Apt15(Apt15-T25)可以检测到0.1 nM的人α-凝血酶。Apt15-T25上的Apt15部分与人α-凝血酶的纤维蛋白原位点结合,仍保持区分人α-凝血酶与人β-和γ-凝血酶的能力。此外,本方法同样可以提高人免疫球蛋白E(IgE)适配体的亲和力。第五章:我们开发了一种基于芘分子标记的荧光开关适配体探针,可以实现IgE的快速检测。茎部具有4对碱基互补的适配体在3’末端和5’末端用单个芘分子标记,并用作亲和探针。IgE的结合诱导适配体构象发生变化,使得适配体末端的芘分子靠近,产生二聚体荧光,通过测量荧光强度可以实现IgE的灵敏检测。我们优化了实验条件,如温度,孵育时间和金属阳离子浓度。在优化的条件下,IgE的检测限约为1.6 nM。该方法显示出良好的特异性并且可以检测稀释的人血清样品中的IgE。