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背景肝细胞肝癌的发病率在过去的几十年里逐渐升高,是恶性肿瘤中死亡率位居第3的肿瘤,即使近年来我们对肝癌的发生发展的认识有了极大的进展,但我们对晚期肝癌的治疗手段仍极其有限。索拉非尼是一个小分子络氨酸激酶抑制剂,抑制VEGFR, PDGFR及Raf家族激酶,在临床上应用于晚期肝癌的治疗,有效性仅在30%左右且多于开始服药后6个月左右产生耐药性,对索拉非尼的抵抗目前仍需要大量研究。目的本研究探讨TNFSF4基因在肝癌细胞中的作用,及其与索拉非尼治疗中的相互关系探讨其与肝癌治疗的相关性,并分析其在肝细胞肝癌临床样本中癌-癌旁组织表达的差异,以探讨TNFSF4基因与肝癌发生发展,治疗的相关性及其可能的分子机制。方法1.通过体外转染TNFSF4敲除慢病毒建立TNFSF4基因敲除的肝细胞肝癌细胞株,分析TNFSF4基因敲除后蛋白质组学的差异,探讨可能的作用。2.利用建立的细胞株进行细胞增殖,体外侵袭的实验,探讨TNFSF4敲除对细胞功能上的影响。利用流式细胞仪分析TNFSF4基因敲除后凋亡周期上的变化。3.加入索拉非尼处理TNFSF4敲除的细胞,探讨TNFSF4在肝癌治疗中发挥的作用。4.收集临床肝细胞肝癌样本,利用PCR技术及免疫组化技术在mRNA层面及蛋白表达层面检测实际临床中癌-癌旁TNFSF4基因表达的差异,探讨TNFSF4基因与肝癌的治疗预后的差异。结果1.TNFSF4基因敲除后细胞JAK-STAT3表达量明显下降,cleaved caspase3明显上调,p53上调而MDM2下调,TGFβ1/2表达下调,N-Cadherin的表达明显上调。2. TNFSF4基因敲除后相比对照组细胞体外侵袭能力及细胞活性明显下降(P<0.001),加入TNFSF4细胞因子后侵袭能力及细胞活性明显恢复(P<0.001)。3. TNFSF4基因敲除后细胞凋亡明显增多,加入细胞因子能逆转细胞凋亡(P<0.001)。TNFSF4敲除后能增强索拉非尼产生的凋亡,协同效应明显(P<0.001),并同样在加入TNFSF4后被逆转。4.肝细胞肝癌临床样本中,肿瘤组织中TNFSF4的mRNA表达量明显低于癌旁组织(P=0.031),3对免疫组化样本中均可见到癌旁组织染色高于癌组织,与PCR结果一致。结论首先,TNFSF4基因敲除下调JAK-STAT3通路,能促进p53表达并同时抑制MDM2表达,cleavedcaspase3及E-Cadherin的含量升高。其次,TNFSF4能敲除能抑制细胞侵袭,抑制增殖活性,促进凋亡,增强对索拉非尼的敏感性,这些效应能在加入’TNFSF4细胞因子后得以逆转。最后,在肝细胞肝癌临床标本中,TNFSF4在表达谱水平与蛋白水平的癌旁的表达高于在癌中的表达。