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目的:绒癌是发生于生育年龄妇女的高度恶性肿瘤,对化疗敏感,是人类最早治愈的实体瘤之一。化疗是绒癌的主要治疗方法,对化疗药物产生耐药是治疗失败的主要原因。耐药病人的死亡率仍徘徊在60%左右,对耐药患者的治疗策略亟待更新。绒癌的耐药多数为获得性耐药,因此逆转肿瘤已经形成的多药耐药,是进一步提高绒癌治疗的有效途径。本研究拟应用基因工程技术将细胞因子基因(huTNF-α)导入已建立的绒癌耐药细胞系JEG-3/VP2,观察huTNF-α基因转导对绒癌细胞耐药性逆转的体内外作用。 方法:本研究用RT-PCR的方法克隆huTNF-α基因,经酶切、连接将huTNF-α基因插入真核表达载体pcDNA3.1-myc-his(-)中,提取质粒,用阳离子脂质体将huTNF-α基因导入绒癌耐药细胞系JEG-3/VP2中,用G418筛选含huTNF-α cDNA片段的单细胞克隆,检测转导后细胞对VP-16耐药指数的变化。用RT-PCR的方法,测定转导前后细胞MDR1mRNA的表达情况。建立绒癌耐药细胞系裸鼠移植瘤模型,测定转导前后移植瘤的瘤重,用RT-PCR方法和免疫组织化学方法,检测huTNF-α基因转导后,绒癌耐药细胞移植瘤中MDR1mRNA和MDR1蛋白(P-gp)表达水平的改变。 结果:转导huTNF-α基因的绒癌耐药细胞中有huTNF-α mRNA的表达,对VP-16的耐药性与未转导细胞相比明显下降(P<0.05),MDR1mRNA的表达水平明显下降。转导huTNF-α基因的绒癌耐药细胞系的瘤重明显低于未转导组,差异有显著性(P<0.05)。转导huTNF-α基因的移植瘤耐药性明显下降,MDR1mRNA和MDR1蛋白表达水平明显低于未转导耐药细胞(P<0.05)。 结论:huTNF-α基因的转导的确能在mRNA水平和蛋白水平逆转耐药绒癌的MDR1,增加绒癌耐药细胞对细胞毒性药物的敏感性,降低其致瘤性。