论文部分内容阅读
马铃薯纺锤块茎类病毒（potato spindle tuber viroid，PSTVd）是近几年影响马铃薯生产的重要病原之一，其对马铃薯的产量和品质具有严重的影响，导致马铃薯品种种性退化和品质下降。感染后马铃薯一般减产30％左右，严重的能高达90%。PSTVd具有极高的侵染性，可通过农机具、切刀、种薯切块摩擦等方式进行汁液传播，也可通过介体昆虫、花粉、种子、块茎、水等方式传播。PSTVd能在马铃薯的任何生育时期进行侵染，并表现多种症状。 本研究以从内蒙古采集到的受 PSTVd侵染的病薯为材料，克隆了PSTVd的全长基因，命名为内蒙古分离株（potato spindle tuber viroid-Inner Mongolia，PSTVd-IM），对其序列进行了分析，构建了PSTVd-IM侵染性克隆，主要取得的研究结果如下： 1.获得了PSTVd-IM全长基因，并对其进行了测序的分析。测序结果表明，该序列大小为359bp，其与株系 EF044305.1序列吻合，同源性高达100%。首次报道了我国PSTVd-IM内蒙古分离株。将此内蒙古分离株序列与已公布的128个全长的PSTVd株系，应用 Mega5.1软件构建了系统进化树，确定了该分离物与国内外该类病毒分离物的亲缘关系，发现该分离物与俄罗斯分离物亲缘关系最近。与已发表的PSTVd强株系（U23058.1）、中间株系（AY937179.1）和弱株系（M14814.1）进行了序列比对和二级结构分析，发现 PSTVd-IM与这三个不同致病性株系在中央保守区、致病区和可变区结构域存在差异，说明这些结构域可能与其致病性相关。 2.构建了PSTVd-IM的侵染性克隆。通过对 PSTVd-IM的序列分析，选取 PSTVd-IM的单酶切位点 EagI对 PSTVd-IM进行等长加倍，实现了PSTVd-IM基因组的二倍化，保证了PSTVd-IM起始位点的完整性，为PSTVd-IM的有效复制奠定了基础。 PSTVd-IM的克隆和序列分析为 PSTVd-IM克隆化载体的构建奠定了坚实的基础。PSTVd-IM克隆化载体的构建便于该类病毒接种和突变体的构建，为该类病毒的致病机制和致病特点的研究奠定了基础。