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月季的育种进程历史悠久,现代月季多为四倍体品种。在培育现代月季过程中引入中国古老月季的优良性状对于促进育种工作的发展十分重要。二倍体的中国古老月季品种’Y18’,具连续开花、抗病、抗寒的特性,被视作中国月季组的代表性模型,为使其与现代月季成功杂交,获得种质优良的新品种,本研究利用秋水仙素诱导二倍体’Y18’无菌苗茎段,成功获得四倍体品种’Y23’,打破了’Y18’与四倍体现代月季品种’H12’的生殖隔离。主要研究成果如下:(1)’Y18’的最适消毒方式是2%NaClO溶液浸泡1Omin。接种在添加1.5 mg/L 6-BA和0.05 mg/LNAA的MS增殖培养基上时,’Y18’的增殖效果最好,平均增殖系数为3.48。将组培苗基部在0.5%IBA中速蘸后接种在不添加激素的1/4MS培养基中,生根速度快,根数量多且较为整齐。将组织培养获得的’Y18’无菌苗茎段在1%秋水仙素溶液中浸泡1h诱导出四倍体的比例最高,为26.1%。四倍体经组织培养快繁后移栽成活率为53.3%。(2)通过表型性状观察,染色体压片法,气孔性状观察,叶绿素含量测定,生理指标测定及流式细胞仪鉴定等试验来鉴定诱导所得植株的倍性,结果显示,诱导获得的植株与二倍体相比株型更加高大,花径显著变长,叶片性状由披针形变为卵圆形,染色体压片结果为2n=4x=28,气孔明显增大,叶绿素a含量显著增加,叶绿素b与总叶绿素含量及过氧化氢酶(Catalase,CAT)活性较二倍体稍有增加,但不存在显著差异,过氧化物酶(Peroxidase,POD)活性与丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量有显著差异。(3)以’H12’为母本,’Y18’和’Y23’作父本,分别进行杂交。结果显示,’H12’×’Y18’不结实,’H12’×’Y23’结实率达80%以上。荧光观察两种花粉在’H12’柱头上的体内萌发结果显示,’Y18’和’Y23’的花粉均可在’H12’柱头上正常萌发,但’Y18’花粉不能正常进入花柱,’Y23’可在’H12’花柱中正常生长并最终进入子房。(4)’H12’×’Y23’共收获50株F1代。对子一代的18个表型性状进行统计分析,提取出8个主成分。聚类分析将50个后代聚成四大类十小组(I-1,1-2,I-3,1-4,II-1,Ⅱ-2,Ⅲ-1,Ⅳ-1,Ⅳ-2 和 Ⅳ-3),第一类(28 株),第二类(3 株),第三类(1株),第四类(18株),其中,前三类花色为粉色系,与父本颜色较为一致,第四类花色为红色系,与母本相近。各性状间相关性分析结果显示,花瓣数量与顶叶长(.344)和皮刺量(.352)极显著正相关,顶叶宽与顶叶长(.466)和节间(.441)极显著正相关。(5)选择F1代植株性状较好的四株’YH03’,’YH14’,’YH37’,’YH39’进行组织培养快繁,’YH03’,’YH14’,’YH37’的最适增殖培养基为MS+1.5 mg/L6-BA和0.05 mg/L NAA;’YH39’最适增殖培养基为 MS+1.5 mg/L 6-BA+0.10 mg/LNAA。相同生根方式下,’YH37’生根率最高,为86.67%。在四株F1代中,’YH37’的发育最为良好,萌芽快,增殖率高,生根效果好,抗逆性较强。因此,本试验所用培养基配方筛选出的最适合组培快繁的材料为’YH37’,其他材料的最佳培养条件有待进一步探索。本研究利用秋水仙素诱导二倍体’Y18’,成功获得其同源四倍体品种’Y23’,二者分别与现代月季’H12’杂交,’H12’×’Y18’不结实,’H12’×’Y23’结实率较高。荧光观察二者体内萌发情况分析产生差异的原因。系统调查分析了’H12’与’Y23’杂交F1代植株表型性状,并选择株型表现较好的四个株系建立了组织快繁体系。