目的:有氧糖酵解是血管内皮细胞主要供能方式,糖酵解关键酶丙酮酸激酶2（PKM2）是外泌体中的常见蛋白。本项目探讨共培养体系中AML来源外泌体（AML-Exo）是否可传递PKM2给人脐静脉内皮细胞（HUVECs）,继而重塑后者糖酵解,最终促进微环境血管形成,为从微环境角度探寻AML治疗新靶点开拓新思路。方法:1.AML-Exo提取与鉴定:超速离心法分别提取AML细胞株U937、HL-60与THP-1细胞的外泌体,Western blot检测外泌体蛋白ALIX、TSG101以及PKM2蛋白水平,电镜下观察外泌体形态,纳米颗粒追踪分析检测外泌体粒径。2.将AML-Exo作用HUVECs 24 h,用PKH67染料染外泌体,Hoechst33345核染料染细胞核,在激光共聚焦显微镜下观察HUVECs对AML-Exo摄取。3.将AML-Exo作用HUVECs 24 h,采用以下指标检测HUVECs生物学行为:CCK8法检测细胞活力,Transwell小室法检测细胞迁移,基质胶成管试验检测细胞血管形成能力。4.海马能量代谢仪检测糖酵解质子流出率指示糖酵解水平,RT-q PCR与Western blot检测PKM2表达水平。5.利用病毒感染法对HUVECs PKM2水平进行过表达与敲减,将HUVECs分为野生组（WT）、阴性对照组（NC）和敲减/过表达组（KD/OE）,分别检测细胞糖酵解水平、活力、迁移、血管形成能力。6.利用病毒感染法对U937的PKM2基因进行敲减与过表达,提取U937-ExoWT、U937-ExoNC、U937-Exoshpkm2、U937-Exooepkm2,作用于HUVECs,以PBS组为空白对照组,检测细胞糖酵解水平、活力、迁移、血管形成能力。结果:1.U937、HL-60、THP-1外泌体（U937-Exo、HL-60-Exo、THP-1-Exo）电镜下可见典型的双凹盘膜结构;粒径分析结果中,三种细胞株外泌体粒径分别为（121.4±40.4）nm、（113.8±56.4）nm、（124.7±35.9）nm;Western blot结果确证了上述细胞株外泌体中有ALIX和TSG101外泌体标记蛋白表达,且均有丰度较高的PKM2蛋白表达。2.激光共聚焦下显示HUVECs在体外主动摄取AML-Exo,带绿色荧光的外泌体在HUVECs胞质内积累。3.与PBS对照组相比,U937-Exo组、HL-60-Exo组、THP-1-Exo组HUVECs活力、迁移能力与血管形成能力均显著增加。4.AML-Exo对HUVECs活力与生物学行为的促进作用与HUVECs中PKM2蛋白含量与活性上调所致的糖酵解水平增高有关。5.HUVECs中PKM2的过表达与AML-Exo处理效应相似,表现为增强HUVECs糖酵解水平、生存活力、迁移能力与血管形成能力;而HUVECs中PKM2的敲减与AML-Exo处理效应相反,表现为减弱HUVECs糖酵解水平、生存活力、迁移能力与血管形成能力。6.与PBS组相比,U937-Exoshpkm2组HUVECs糖酵解水平变化不显著,而U937-ExoNC组与U937-ExoWT组基础糖酵解与补偿糖酵解水平均显著提高;与U937-ExoNC组相比,U937-Exoshpkm2组HUVECs的活力、迁移与血管形成能力显著减弱。7.与U937-ExoNC和U937-ExoWT组相比,U937-Exooepkm2组的HUVECs的糖酵解水平、活力、迁移和血管形成能力显著增加。结论:AML-Exo通过传递PKM2蛋白改变糖酵解水平,重塑人脐静脉内皮细胞,促进微环境血管形成。