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目前,MUC1作为腺癌诊断的肿瘤标志物之一得到广泛研究。但现有的检测手段敏感度较低,为提高检测的敏感度,本科室建立了双抗体夹心ELISA法。首先,我们制备两种融合蛋白MUC1-GST和MUC1-MBP,将这两种蛋白分别免疫家兔和大鼠,获得两种抗MUC1多克隆抗体的血清,经饱和硫酸铵沉淀、protein A/G纯化及抗GST抗体的吸收获得部分纯化的家兔及大鼠抗MUC1多克隆抗体;通过凝血酶溶解MUC1-GST获得MUC1标准品,经过进一步的筛选,确立了双抗体夹心ELISA法的包被抗体、检测抗体及二级抗体分别为兔抗MUC1抗体、大鼠抗MUC1抗体和HRP-山羊抗大鼠IgG以及MUC1标准品浓度。采用此方法对健康人和多种腺癌患者的外周血MUC1水平进行检测。检测结果为:120例健康人检测结果全为阴性,检测特异度为100%;乳腺癌检测敏感度为100%,乳腺良性疾病患者的检测特异度为78%;胃肠癌检测敏感度为88.2%,胃肠良性疾病检测特异度为93%;肺癌检测敏感度为88.2%,肺良性疾病检测特异度为100%;子宫和卵巢癌症检测敏感度为83%,子宫和卵巢良性疾病检测特异度为92.5%;肝癌的检测敏感度为36.4%,肝良性疾病检测特异度为93%。双抗体夹心ELISA法与CA15-3试剂盒对乳腺癌患者、乳腺良性疾病患者和健康人群比较检测结果,通过绘制ROC曲线对比显示,双抗体夹心ELISA法对乳腺癌的诊断准确率明显高于CA15-3试剂盒。上述研究结果提示,本研究建立的双抗体夹心ELISA法对乳腺癌、胃肠癌、肺癌诊断敏感度明显提高,有望开发为临床辅助诊断的常规试剂盒,尤其有望应用于乳腺癌的大规模筛查及早期诊断。