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背景与目的:慢性乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染是一个世界性的公共健康问题(共计约四亿人口)。大多数慢性乙型病毒性肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者均有不同程度的肝纤维化病理改变。肝纤维化作为一组慢性进展性肝损伤反应,若不及时诊治,极有可能发展为肝硬化乃至肝癌。各个乙肝防治指南一致推崇显著性肝纤维化(S≥2)作为抗病毒治疗的重要指征,争取肝纤维化是在早期肝硬化可以得到逆转。因而,肝纤维化、肝硬化的早期诊断显得尤为重要。肝组织活检虽为金标准,但局限性也显而易见。肝纤维化无创性诊断方法(包括Fibro Scan与血清学指标或模型)由此应运而生,在诊断慢性乙型病毒性肝炎患者纤维化方面体现出一定价值。本研究拟在大样本基础上评估Fibro Scan、肝纤维化血清学模型(AAR、API、APRI、GPRI、S index、FIB-4与Fibro-Q)单独或联合诊断显著性肝纤维化的诊断准确度,挑选出更适合基层社区医院诊断肝纤维化的血清学模型,并分析炎症活动对Fibro Scan结果的影响。同时,寻找新的与肝纤维化程度相关的血清细胞因子,评估其诊断显著性肝纤维化的效能;进一步探索这类与纤维化相关的因子(本研究中为MIP-3α)所具有的潜在致纤维化机制。方法:第一部分:无创模型诊断肝纤维化价值的研究收集来我院同时行肝脏穿刺检查、Fibro Scan与实验室检查的CHB患者的临床资料与血清标本(各检查间隔时间不超过2天)。参照2000年《病毒性肝炎防治方案》,进行肝组织的纤维化分期(S0~S4)以及炎症分级(G0~G4),分别评估Fibro Scan、肝纤维化血清学模型(AAR、API、APRI、GPRI、S index、FIB-4与Fibro-Q)诊断显著性肝纤维化(S≥2)的价值,并分析炎症分级对Fibro Scan结果的影响。第二部分:肝纤维化血清标志物的筛选蛋白芯片初筛的8例患者包括CHB患者4例,CHB相关性肝硬化4例。共筛选507个因子,以期从中获得两组之间存在差异性表达的因子。酶联免疫吸附法(enzyme-linkedimmunosorbentassays,elisa)主要筛选2012年3月至2013年11月间第三军医大学第一附属医院于两日内同时行肝穿刺术、fibroscan以及实验室检查的chb患者。研究对象分为健康志愿者、非显著性肝纤维化者以及显著性肝纤维化者。检测指标包括巨噬细胞炎性蛋白-3α(mip-3α)、转化生长因子β以及血小板衍生生长因子-bb(pdgf-bb)。第二部分:mip-3α对肝星状细胞活性与增殖的影响采用体外培养人肝星状细胞lx-2,将细胞分为空白对照组和不同浓度mip-3α共培养的实验组。24小时后,运用elisa法检测细胞培养上清液pdgf-bb的含量,mtt法检测细胞增殖情况。结果:第一部分:无创模型诊断肝纤维化价值的研究1.fibroscan、sindex、gpri、fib-4、apri、api、fibro-q及aar诊断显著性肝纤维化的auroc依次为0.757(p<0.001)、0.726(p<0.001)、0.726(p<0.001)、0.621(p=0.001)、0.619(p=0.001)、0.580(p=0.033)、0.569(p=0.066)及0.495(p=0.886)。2.fibroscan联合sindex以及gpri诊断显著肝纤维化的auroc依次为0.753(p<0.001)、0.740(p<0.001)。3.fibroscan在不同炎症分级阶段(g0、g1、g2、g3、g4)诊断显著性肝纤维化的auroc分别为0.8267(p<0.001)、0.6956(p<0.001)、0.7092(p=0.0012)与0.6947(p=0.137)。4.肝硬度值在非显著性肝纤维化患者呈显著性增加(g0vs.g1,p=0.051;g1vs.g2,p=0.005;g2vs.g3,p<0.001);而在显著性纤维化患者中,虽然肝硬度值在升高,但相邻两组之间并无统计学差异(g0vs.g1,p=0.135;g1vs.g2,p=0.294;g2vs.g3,p=0.260;g3vs.g4,p=0.056)。第二部分:肝纤维化血清标志物的筛选1.在肝硬化与非肝硬化的chb患者对比中,有下列12种蛋白因子存在显著差异性(p<0.05):β-链蛋白、cd27、cd163、内皮素、人粒细胞趋化蛋白-2、白介素il-12p40、巨噬细胞游走抑制因子、组织因子途径抑制素、尿激酶型纤溶酶原激活剂、血管内皮生长因子以及wnt诱导的分泌型蛋白1。2.mip-3α具有诊断显著性肝纤维化的作用(auroc=0.724,p<0.001)。第三部分:mip-3α对肝星状细胞活性与增殖的影响当共培养的MIP-3α浓度依次为0 ng/ml、250 ng/ml、500 ng/ml、1μg/ml、2μg/ml时,ELISA法检测细胞培养上清液PDGF-BB对应的光吸收平均值分别为0.0608、0.2533、0.1112、0.0561以及0.0581;MTT法检测细胞增殖情况,相应的光吸收平均值分别为1.6550、0.9670、1.1319、1.1405以及1.2157。结论:1.Fibro Scan诊断慢性乙型肝炎肝纤维化准确度较高,但临床应用时易受肝脏炎症活动的影响。2.较我们评估的其他血清学模型,GPRI与S index诊断显著纤维化的效能最高,是基层医院或无Fibro Scan时,评估CHB患者肝纤维化程度的简单有效指标。3.肝脏炎症分级对显著性肝纤维化患者的肝硬度值无显著影响,但严重的炎症活动可降低Fibro Scan诊断准确度。4.血清MIP-3α水平可有效地诊断HBV相关性显著肝纤维化。5.MIP-3α能够激活肝星状细胞。