支架蛋白IQGAP1对食管鳞癌细胞迁移、侵袭和MMP-2表达的影响及机制研究

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目的:1.探究IQGAP1(IQ motif containing GTPase activating protein 1)对食管鳞癌细胞迁移和侵袭的影响。2.探究IQGAP1对MMP-2基因表达和活性的影响。3.探究IQGAP1影响食管鳞癌细胞迁移和侵袭以及MMP-2基因表达和活性的分子机制。方法:1.将GFP-IQGAP1质粒和对照组空载质粒转染至EC9706细胞中,将IQGAP1短发卡RNA质粒和阴性对照组转染至KYSE150细胞中,通过Western blot实验验证IQGAP1高表达细胞系和IQGAP1基因敲降细胞系的建立是否成功。2.采用MTT实验和平板克隆实验检测IQGAP1高表达或基因敲降对食管鳞癌细胞增殖能力的影响;通过划痕愈合实验、Transwell实验检测IQGAP1高表达或基因敲降对食管鳞癌细胞迁移和侵袭能力的影响。3.通过Western blot实验和Real-Time PCR实验检测IQGAP1高表达或基因敲降细胞系中MMP-2蛋白及m RNA的表达水平;采用明胶酶谱实验检测IQGAP1高表达或基因敲降细胞系中MMP-2的活性。4.通过Western blot实验、细胞免疫荧光实验检测IQGAP1对NF-κB信号通路的影响以及PDTC对NF-κB信号通路的影响;采用NF-κB抑制剂PDTC作用于IQGAP1高表达细胞系,通过划痕愈合实验、Transwell实验检测PDTC对食管鳞癌细胞迁移、侵袭能力的影响;通过Western blot实验、Real-Time PCR实验和明胶酶谱实验检测PDTC对食管鳞癌细胞中MMP-2表达及活性的影响。结果:1.Western blot实验结果显示IQGAP1高表达细胞系能表达GFP-IQGAP1融合蛋白,而对照组细胞无。IQGAP1基因敲降细胞系的IQGAP1表达水平明显低于对照组细胞。2.MTT实验和平板克隆实验结果显示IQGAP1高表达细胞系的增殖能力明显高于对照组细胞(P<0.05)。IQGAP1基因敲降细胞系的增殖能力明显低于对照组细胞P<0.05)。划痕愈合实验、Transwell实验结果显示,与对照组细胞相比,IQGAP1高表达组细胞具有更强的迁移和侵袭能力(P<0.05),而IQGAP1基因敲降组细胞迁移和侵袭能力减弱(P<0.05)。3.Western blot实验、Real-Time PCR实验及明胶酶谱实验结果显示与对照组细胞相比,IQGAP1高表达细胞系具有更高的MMP-2表达水平和功能活性(P<0.05)。而IQGAP1低表达细胞系的MMP-2表达水平和功能活性降低(P<0.05)。4.Western blot实验结果显示,IQGAP1高表达细胞系中NF-κB(p65)表达增高(P<0.05)。IQGAP1基因敲降细胞系中NF-κB(p65)表达降低(P<0.05)。免疫荧光显示IQGAP1高表达细胞系中,NF-κB(p65)核定位水平增多,IQGAP1基因敲降细胞系中NF-κB(p65)核定位水平降低。Western blot实验、划痕愈合实验、Transwell实验结果显示,PDTC处理IQGAP1高表达细胞后,NF-κB(p65)表达水平降低,细胞的侵袭、迁移能力受到抑制。免疫荧光显示,PDTC处理IQGAP1高表达细胞后,NF-κB(p65)核定位水平降低。Western blot实验、Real-Time PCR实验和明胶酶谱实验结果显示,PDTC处理IQGAP1高表达细胞后,MMP-2表达水平和功能活性受到抑制。结论:1.IQGAP1促进食管鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭。2.IQGAP1促进食管鳞癌细胞MMP-2的表达及功能活性,提示IQGAP1可能通过调控MMP-2来影响肿瘤细胞的迁移和侵袭。3.IQGAP1通过NF-κB信号通路来调控食管鳞癌细胞的迁移、侵袭能力,以及MMP-2的表达和活性。
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