小麦穗发育中时期特异性转录组分析及穗型相关基因的克隆与功能解析

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穗发育与穗粒数的形成密切相关。目前在拟南芥和水稻等植物中,对花序/穗发育的遗传调控都进行过系统的研究,然而在小麦中却缺少相关的报道。为了解析小麦穗发育的分子基础和基因表达动态,对小麦穗发育的前6个阶段:未伸长期、伸长期、单棱期、二棱期、护颖原基分化期和小花原基分化期的茎尖或幼穗做了RNA-Seq分析。主要结果如下:  (1)在小麦穗发育前6个阶段中共检测到了53306个表达基因和4136个差异表达基因,分别占小麦已注释基因数目的53.6%和4.2%。  (2)穗发育中基因表达变化保守且无基因组范围内的显性效应。  (3)差异表达基因可分为6个共表达类群。每个类群都有大量转录因子被富集,3个类群富集了海藻糖合成/代谢相关的基因。细胞分裂素代谢、激素响应、表观调控、RNA介导的基因沉默相关的基因也在不同的类群中富集。  (4)海藻糖合成相关基因在护颖原基分化期有明显的上调;细胞分裂素脱氢酶/氧化酶基因在单棱期有明显的下调;生长素响应因子基因在单棱期和二棱期都有上调,但在二棱期的上调更为明显。  (5)穗发育中共检测到306个差异表达的转录因子。转录因子更倾向于按照功能而非家族共表达。维持分生组织活性的AP2/ERF亚家族的转录因子主要在未伸长期到单棱期高水平表达;大量与逆境/信号响应相关的转录因子在单棱期和二棱期高水平表达;极性建立相关的转录因子在单棱期、二棱期到小花原基分化期高水平表达;抑制开花和促进开花的基因分别随着穗发育下调或上调表达;参与花器官特化的MADS家族的转录因子在小花原基分化期高水平表达。  (6)部分同源基因三个拷贝(HTs)在表达上存在亚基因组贡献差异。物质代谢和细胞内物质运输相关的基因更容易存在这种表达差异。  穗型变异,尤其是多小穗型变异是提高小麦穗粒数的一种有效方式。簇生小穗型是多小穗型的一种类型。YM44是具有簇生小穗的一个地方品种。我们通过同源克隆和遗传连锁分析,克隆了YM44中调控簇生小穗的基因。并利用原位杂交以及RNA-Seq等技术对该基因的功能进行了初步解析。主要结果如下:  (1) YM44的部分小穗分生组织转变为了小穗簇分生组织。  (2)簇生小穗由TOO MANY SPIKELTS(TMS)/Wheat FRIZZY PANICLE(WFZP)-A、D两个基因控制。YM44中TMS/WFZP-A和D基因分别由于序列缺失和表达沉默而功能缺失。WFZP-D位点在F2群体中存在一定程度的偏分离。  (3) YM44中tms/wfzp-D基因在-1728--695的启动子区域高度甲基化。  (4) TMS/WFZP基因主要在护颖原基分化期表达,且表达区域主要集中在小穗分生组织和花序分生组织的交界处。  (5) TMS/WFZP基因在禾本科中的功能有分化,在小麦中主要调控腋生分生组织的分化方向,而不调控小穗分生组织向花分生组织的转换。  (6) TMS/WFZP功能的发挥可能需要TaTERMINAL FLOWER1(TaTFL1)的参与。  (7)小麦的TMS/WFZP基因具有转录激活活性。  (8) TMS/WFZP可能参与了部分海藻糖合成酶基因的激活。
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