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背景及目的万特普安（铜绿假单胞菌注射液）是一种含有甘露糖敏感血球凝集素菌毛（MSHA）的铜绿假单胞菌（PA），可以识别并结合细胞表面的甘露糖受体，抑制肿瘤细胞上EGFR受体的活化，进而抑制肿瘤细胞。目前已有研究证明对肺癌、肝癌、胃癌、结直肠癌、乳腺癌等在内的肿瘤具有明显的抗癌作用。但是该药对膀胱癌是否具有抗癌效应，仍然没有有效的证据支持。因此本实验研究主要探讨万特普安（PA-MSHA）对膀胱癌在体外及体内的抗癌活性及其主要机制。方法1、选取正常尿路上皮细胞系(SV-HUC-1)和三种膀胱癌细胞系（T24,5637,HT-1376）,分别经不同浓度PA-MSHA处理24h,48h,72h后，通过CCK-8检测法检测药物对细胞增殖能力的影响。2、通过透射电镜观察PA-MSHA处理24h后膀胱癌细胞超微结构的改变。3、流式细胞术（FCM）检测不同浓度药物处理24h后膀胱癌细胞系的凋亡情况。4、通过western blot检测经药物处理24h后膀胱癌细胞系凋亡相关蛋白的表达，包括caspase-3,8,9,以及EGFR及其下游通路关键蛋白的表达，包括EGFR，AKT和ERK。5、将T24细胞接种于裸鼠皮下进行荷瘤，待瘤体长出后，于瘤内注射药物，观察药物对瘤体的影响。6、42天后，处死裸鼠取出肿瘤组织，通过TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡情况，通过western blot检测EGFR及其下游通路关键蛋白的表达。结果1、药物处理后，可发现对三种膀胱癌细胞系均有明显的抑制增殖效果，但是对SV-HUC-1效果较差。通过电镜观察可发现膀胱癌细胞在形态学上发生明显的凋亡改变。2、通过流式细胞术检测发现经PA-MSHA处理后细胞凋亡，并且凋亡率随药物浓度增加而升高。western blot结果显示随药物浓度增加caspase-3,8,9表达量下降，而cleaved caspase-3,8,9表达量上升。3、进一步检测细胞EGFR及其下游通路关键蛋白的表达，可发现总EGFR,AKT,ERK的表达量不变，但是磷酸化蛋白的表达量随浓度增加而下调。4、经药物注射后，肿瘤体积与对照组相比明显减少，瘤体生长缓慢并有减小趋势。5、 TUNEL法实验结果显示，经PA-MSHA处理过的肿瘤组织凋亡明显增加。6、进一步检测肿瘤组织EGFR及其下游通路关键蛋白的表达，可发现EGFR,AKT,ERK的蛋白总表达量不变，但是磷酸化蛋白的表达量随浓度增加而下调结论1、 PA-MSHA无论在体外还是体内，对膀胱癌细胞均有明显的抑制增殖并且诱导凋亡的作用。2、 PA-MSHA可明显抑制膀胱癌细胞EGFR通路的活性，故可能为其抑制膀胱癌的作用机制。