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1.一种新型低毒的有机铜化合物的合成、鉴定及抗肿瘤活性研究
铜是我们研究比较清楚的具有抗肿瘤活性的金属,很多文献表明无机铜和有机铜都具有良好的抑瘤效果,但铜的氧化伤害使其成为一把双刃剑,铜的强氧化性会对多种脏器甚至DNA造成损伤。β-丙氨酰组氨酸(肌肽,β-AH)是一种内源性的二肽,具有抗氧化、抗衰老和抗癌等作用,组氨酸的咪唑环使其具有很强的金属鏊合能力。我们利用β-丙氨酰组氨酸作为配体制备了一种新型低毒的有机铜化合物β-AH-Cu,并采用元素分析,紫外光谱及X衍射光谱确定了β-AH-Cu的结构。β-AH-Cu的腹腔注射LD50值为54.6mg·kg-1,95%置信区间为42.5~70.1mg·kg-1,而醋酸铜的LD50值为25.7mg·kg-1(95%置信区间为17.5~37.8mg·kg-1)。由此可以看出,β-AH-Cu的相对毒性仅为醋酸铜的0.47。除此之外,23μmol·kg-1的β-AH-Cu对小鼠的体重和血液指标(白细胞数目除外)均没有显著影响(p>0.05)。体内和体外的实验结果显示,人肝癌细胞QGY-7703,人肺癌细胞A549和人胃癌细胞MKN45这3种细胞在β-AH-Cu存在时的存活率随着药物浓度的增加而减少,此外,当β-AH-Cu的浓度为23μmol·kg-1时对小鼠Lewis肺癌的体内抑瘤率达到了51.97%。β-丙氨酰组氨酸是一个合适的配体,在降低铜的氧化伤害的同时,维持了铜离子的抗肿瘤活性。
2.氯化镍诱导jurkat细胞凋亡分子机理的进一步研究
镍是一种过渡金属,易致癌,也有免疫调节作用。免疫器官是镍化合物发挥毒性作用的重要靶器官。然而,镍化合物对免疫系统的毒性机制到目前为止还不是很清楚。我们以前的实验证明了氯化镍通过诱导线粒体凋亡从而导致了jurkat细胞的凋亡,并且这种凋亡和线粒体膜电位的塌陷及bcl-2基因表达的下调相关。
本文主要研究了活性氧物质(Reactive Oxygen Species,ROS)在氯化镍引起的细胞凋亡中的作用。在以前工作的基础上,采用体外培养jurkat细胞,不同剂量氯化镍(0~80μg/ml)分别作用6h,12h,24h,测量细胞内GSH及GSSG的含量,并且用硝酸还原酶法测定细胞内的一氧化氮的含量;而后,用N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)作为ROS抑制剂并处理细胞,同样用氯化镍作用细胞相同的时间测量细胞内的GSH、GSSG以及一氧化氮的含量,结果表明NAC可以抑制氯化镍引起的细胞GSH的下降、GSSG和一氧化氮的上升。与此同时,Annexin-V-PI双染色法的结果表明NAC可以明显降低氯化镍引起的细胞凋亡。这说明了ROS在氯化镍引起的凋亡中起重要作用。为了从分子水平进一步阐述氯化镍引起jurkat细胞凋亡的机制,我们利用RT-PCR技术检测了HO-1、iNOS、eNOS基因转录情况。结果显示氯化镍导致了HO-1、iNOS基因表达的下调,NAC可以抑制这种变化。通过以上实验,我们认为氯化镍对jurkat细胞的毒性,极有可能是通过ROS引起HO-1、iNOS基因表达的下调,从而导致了细胞凋亡。