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本文用乙二胺四乙酸二酐(EDTAD)和醛基封端聚乙二醇(PEG-dial)对明胶蛋白进行复合改性,再经戊二醛交联制备出复合改性明胶蛋白凝胶(P/EG)。研究了EDTAD酰化改性工艺条件,并对其进行优化,探讨了用EDTAD和醛基封端聚乙二醇复合改性制备凝胶的工艺条件,对复合改性凝胶的溶胀过程和药物释放性能进行了讨论。
⑴研究了复合明胶蛋白凝胶制备中酰化反应的工艺条件,发现在酰化反应前将3%的明胶蛋白溶液pH调至10,于65℃水浴加热30min,蛋白质分子可得到较好的伸展,有利于酰化反应的进行;研究发现原料质量比即m(EDTAD):m(Gelatin)对于明胶蛋白与EDTAD的反应方式、凝胶质构与溶胀率都有显著的影响。用正交实验对酰化改性的工艺条件进行了优化,正交实验结果显示,当m(EDTAD):m(Gelatin)为1:15,酰化温度为40℃,反应pH为9.5,反应时间为4h时,制得的凝胶溶胀率为188.0 g·g-1,其中m(EDTAD):m(Gelatin)是影响凝胶溶胀率的最重要因素。这与EDTAD对明胶蛋白分子链的结构与状态的影响有关。红外光谱显示经EDTAD改性的明胶蛋白形成了更多的酰胺基,从而在肽链上引入了更多的羧基。
⑵将明胶蛋白预处理后,用EDTAD和醛基封端聚乙二醇对其进行改性,再经戊二醛交联制备复合改性明胶蛋白凝胶。探讨了醛基封端聚乙二醇与明胶蛋白的还原胺化反应,发现醛基封端聚乙二醇的用量对改性程度有影响,随着醛基封端聚乙二醇用量的增多,改性程度增大。研究了醛基封端聚乙二醇和戊二醛用量对复合改性明胶蛋白凝胶的溶胀和质构性能的影响,发现随着醛基封端聚乙二醇和戊二醛用量的增多,凝胶的溶胀率有所减少,破裂强度有所增大,当m(PEG-dial):m(EDTAD):m(Gelatin)为4:1:15,m(戊二醛):m(Gelatin)为1:100时制得凝胶的溶胀率为133.7 g·g-1,破裂强度为27.5g。通过红外光谱表征发现,复合改性后蛋白质分子在2888 cm-1吸收峰明显增强,显示-CH2增多;在1965 cm-1,在2742cm-1和2688 cm-1处出现醛基鉴别的特征峰,说明分子中还引入了醛基封端聚乙二醇的醛基。从SEM观察到复合改性凝胶的断面粗糙,并具有一定的纹路和形态。
⑶研究了复合改性明胶蛋白凝胶在不同pH缓冲液中和在氯已定药液中的溶胀过程,结果显示EDTAD改性凝胶(EG)和复合改性凝胶(P/EG)在缓冲液中溶胀过程有明显不同,复合改性凝胶在不同缓冲介质以及氯已定药液中具有不同的溶胀规律。讨论了pH7.4和pH4.5的缓冲溶液介质中凝胶体外药物释放性能,及EDTAD用量、醛基封端聚乙二醇用量和戊二醛用量与累积释药率的关系。发现凝胶在体外药物释放性能与其溶胀性能密切相关。探讨了P/EG和EG两种改性凝胶的药物释放机制,P/EG在pH7.4和pH4.5缓冲液中的药物释放均以Fick扩散为主,P/EG适合在pH4.5下快速释放,在pH7.4下缓释上的应用;EG和P/EG两种不同凝胶在pH7.4的缓冲液中的药物释放也以Fick扩散为主,EG比P/EG在pH7.4介质中更快速释放。