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香樟的经济价值很高,是一种香料资源,树体各部分均可入药,树形美观,适合用作绿化观赏树种,材质优良。樟油中主要含芳樟醇,芳樟醇可配制香精,目前,香樟仍处于自然生长状态,为了营造高含量芳樟醇的优良无性系基地,首先要对优良单株进行选择、分类。一直沿用至今的香樟划分方法,是以芳樟醇含量为主要依据。但是芳樟醇含量受环境因子及植物发育阶段等影响,难以准确地鉴定。 本研究应用RAPD分子标记手段,研究香樟优树的遗传多样性和个体发育上差异。建立了香樟优树的RAPD标记的标准程序,为高芳樟醇含量的香樟的鉴定、分类提供了准确、可靠的方法,并把香樟优树的分子分类与传统分类作比较。主要结果与结论如下: 1、香樟中酚类化合物和单宁类物质含量高,DNA提取利纯化非常困难,本研究用SDS法并加以改良。 2、建立了香樟RAPD分析的技术体系:20ul反应体系中,含1×Buffer,2.0mmol/LMgCl2,0.2umol/L的随机引物,150umol/LdNTP,1.5uTag酶.50-80ng/ml。反应程序为:94℃预变性5min,然后执行38个扩增循环,每个循环中,94℃变性30S,38℃复性30S,72℃延伸90S,最后72℃延伸7min。 3、以S系列的S1-S100共100个引物中筛选出能够扩增出稳定产物、扩增带清晰、特异性强的19个引物,供RAPD分析用。19个引物扩增的位点总数为145个,多态位点为86个,多态位点占总数的59%。 4、依据RAPD标记对供试材料进行了聚类分析,结果表明,应用RAPD资料所构建的树状聚类图,当取值水平在D=0.73上时,可将16份样品划分为5类,不难看出,香樟优树个体间既有显著的差别,又存在内在联系。 5、香樟优树依据所提取的芳樟醇的量,用最短矩离法进行分类,结果与分子分类并不完全一致。其主要原因是:一方面由于香樟中芳樟醇含量受环境因子及发育阶段的影响,不同季节精油含量、化学成分不同;另一方面是香樟生长历史悠久,在野生繁殖时,由于花粉杂交或自身变异引起香樟生化类型发生变化。 总之,分子分类方法是十分灵敏、有效的手段,可以准确鉴别形态十分相似的单株。