人类N-乙酰化酶(NAT2)基因定位于染色体11q8，全长1217bp，其中870bp的基因区段的变异是引起人体异烟肼乙酰化多样性的原因。早在40年前，人们就发现了机体中NAT2功能的变异与异烟肼乙酰化作用的多样性是相关的。目前已发现NAT2至少存在16个点突变，这些点突变的不同组合构成至少35种不同的等位基因。试验表明，NAT2酶的代谢活性与基因多态性呈良好的相关性，检测以上几种点突变，就可以准确地预测NAT2酶的活性及个体对相关药物及化合物的代谢能力，对临床个体化合理用药有重要意义。　　 柳氮磺吡啶(SASP)被认为是治疗类风湿性关节炎的首选药物，同时也是炎性肠病治疗的常用药物。柳氮磺吡啶在肠道内被分解为磺胺吡啶(SP)和5-氨基水杨酸(5-ASA)，SP吸收后在体内经NAT2代谢成乙酰磺胺吡啶(AcSP)。不同基因型患者的NAT2对药物的代谢能力差别很大，造成服药后SP、AcSP血药浓度的明显差异，从而影响药物的疗效或产生不良反应。　　 本研究建立了三维凝胶NAT2基因分型芯片的制备方法，检测了101例汉族男性健康志愿者基因型。从中筛选出快、中、慢代谢型志愿者各6例，分别口服SASP肠溶片1.0 g，利用HPLC法测定血药浓度，研究其基因型与药物代谢之间的关系。　　 1.三维凝胶NAT2基因分型芯片的制备与优化　　 研制NAT2基因分型芯片，以快速、准确检测患者的NAT2单核苷酸基因多态性。设计并合成中国人中常见的NAT2酶基因五个突变位点的探针对和包含五个突变位点的两对引物：样本经PCR扩增后，采用丙烯酰胺点样液制各芯片，并与TEMED反应固化芯片；分别用探针与芯片杂交，采用博奥晶芯LUXSCAN10K微阵列芯片扫描仪分析结果。试验优化了PCR扩增条件，使两组PCR在相同条件下扩增；优化了芯片制备及杂交条件，双链DNA采用碱变性，清除非特异键合采用电泳方法；建立了NAT2酶基因分型标准：信号强度Cy3：Cy5≥5为野生型，Cy3：Cy5为0.6-1.5时为杂合子，Cy3：Cy5≤0.2为突变型，对20例标本的基因分型结果采用直接测序法进行验证，结果均一致。表明三维凝胶NAT2基因点突变分型芯片法是一种特异性强、高通量的NAT2基因分型方法，适用于临床快速基因分型，指导相关药物合理使用。　　 2.HPLC梯度洗脱法测定人血浆中SASP及其代谢物　　 研究建立了人血浆中SASP及其代谢物SP、AcSP浓度的高效液相色谱(HPLC)测定方法。液相分离采用Hedera ODS-2分析柱，柱温：30℃，以甲醇-0.05 mol·L-1乙酸铵溶液(含0.1％三乙胺)溶剂系统梯度洗脱，流速为1.0ml·min-1，进样量20μl；检测波长：243nm。以苯巴比妥(PB)为内标，血浆样品用甲醇沉淀蛋白后取上清液进样分析。结果血浆中无内源性物质干扰测定；在0.5～100mg·L-1范围内SP、AcSP和SASP均呈良好的线性关系，相关系数r均>0.9992；提取回收率(n=5)分别为97.1％～101.3％、97.7％～103.3％、94.9％～102.3％；日内RSD分别为1.44％～3.04％、1.76％～3.85％、2.12％～3.22％，日间RSD分别为2.01％～3.69％、2.11％～3.99％、2.56％～3.56％。本方法操作简便、选择性好、准确、灵敏，可用于柳氮磺吡啶的药代动力学研究。　　 3.三种基因型18名受试者SASP药代动力学研究　　 本实验研究了不同NAT2基因型个体间SASP及其代谢物的药代动力学差异，为临床合理用药提供依据。我们从经过基因分型的101名健康志愿者中选择18名进行药代动力学试验，根据基因型把他们分成野生型纯合子(NAT2*4/*4)、杂合子(NAT2*4/*5、NAT2*4/*6、NAT2*4/*7)、突变型纯合子(NAT2*6/*6、NAT2*7/*7)三组，每组6人。受试者禁食10小时后，于次日晨空腹单剂量口服SASP肠溶片1000mg。取服药后各时间点的静脉血用高效液相色谱法测定血药浓度。用3P97计算药动学参数，并用SPSS16.0统计软件分析各参数差异。快、中、慢三种基因型受试者SP的药动学参数分别为：Cmax：4.6±1.4 mg·L-1，6.1±1.7mg·L-1和9.6±2.3 mg·L-1；Tmax：14.1±2.2 h，16.0±2.5 h和15.2±2.5 h；t1/2：7.6±1.1 h.11.3±1.9 h和15.2±5.7 h；CL：0.49±0.14 L·h-1·kg-1，0.41±0.09L·h-1·kg-1和0.32±0.12 L·h-1·kg-1；AUC0-72:71.4±17.5 mg·h·L-1，103.4±39.8mg·h·L-1和172.6±49.4 mg·h·L-1；AcSP的药动学参数分别为：Cmax：12.7±3.3mg·L-1，9.1±2.3 mg·L-1和4.2±0.93 mg·L-1；Tmax：18.9±3.4 h，21.6±2.3 h和26.9±3.18 h：t1/2:12.5±1.8 h，19.3±3.6 h和29.9±5.42 h；CL：0.84±0.16 L·h-1·kg-1，1.14±0.28 L·h-1·kg-1和1.48±0.34 L·h-1·kg-1；AUC0-72:193.4±52.4 mg·h·L-1，161.5±44.8 mg·h·L-1和79.4±26.3 mg·h·L-1。与快代谢型(野生型纯合子)相比，SP在中、慢代谢型中t1/2延长、Cmax增加、AUC0-72增大，三组间三种参数均存在显著性差异(P<0.05)；AcSP中、慢代谢型t1/2延长、Cmax降低、AUC0-72减小，三组间各参数均同样有显著性差异(P<0.05)；SASP的各药动学参数在三组受试者间则无显著性差异。NAT2基因型影响SP的代谢过程，在NAT2基因突变的个体，SP的体内代谢明显减慢，而SASP的代谢过程与NAT2的基因多态性无关。检测NAT2的基因型可预测人体内SP的代谢特点，为相关药物的个体化用药提供科学依据。