肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是世界范围内第四位常见肿瘤,每年大约有250,000名患者死于肝细胞癌。早期肝癌很难发现,一旦出现症状,大多已经到了晚期。尽管手术切除是最重要的治疗手段,但80％的病人被诊断时已不具备手术条件,因此发现肝细胞癌相关的抗原,提供新的标志物,对早期发现肿瘤和观察肿瘤发生发展至关重要。标志物是可以作为指标来检测或评价正常的生物进程,病理过程或服用药物后的药理学反应的某种物质。这类物质可能是循环物质,可在细胞、组织或体液中出现,人们能利用化学免疫和分子生物学等技术对血液或分泌物进行定性或定量地检测。甲胎蛋白是目前临床上最常用的一种肝细胞癌肿瘤标志物,甲胎蛋白的应用对HCC病人早期诊断及手术治疗起了至关重要的作用,但是AFP的准确率只有66％左右且存在种族差异性,我国的肝细胞癌患者有30％-40％属于AFP阴性。本实验的目的在于寻找一种新的肝细胞癌的标志物,与AFP联合使用或者单独使用,提高肝细胞癌的早期检出率,对提高病人的生存期具有关键的作用。 首先,用基因工程的方法分别在两个表达载体构建了23个蛋白的融合载体,并在大肠杆菌中进行表达,不同的载体蛋白带有不同的标签,分别用来免疫及筛选,解决了单抗筛选中抗标签抗体的干扰；免疫BALB/c小鼠后用传统方法制备单克隆抗体；对单抗进行ELISA、Western blot、间接免疫荧光、免疫组织化学的验证。 结果显示,19个融合蛋白在宿主菌中以包涵体的形式得到高表达；免疫小鼠后,通过5次细胞融合,用杂交瘤技术筛选得到了针对5个蛋白的45株单克隆抗体；并对45株抗体进行了Western blot、间接免疫荧光及免疫组织化学验证,其中针对一种蛋白的抗体在正常肝组织和肝癌组织中呈现出明显差异,同时在正常肝细胞系及肝癌细胞中也呈现出明显的表达差异。