论文部分内容阅读
目的：探讨体外循环期间血液中CD14+单核细胞TLR2、 4表达变化的规律，以及地塞米松对外周血液中CD14+单核细胞TLR2、 4受体表达的影响。方法：选择拟行择期房、室缺修补手术20例，随机分为两组：对照组(CON组)和地塞米松组(DXM组)，每组各10例。全麻诱导前DXM组给地塞米松1mg／kg，CON组给同样体积的生理盐水。分别于麻醉诱导前(T1) 、CPB前(T2) 、主动脉开放时(T3) 、主动脉开放30分钟(T4) 、术后5小时(T5) 、术后第二天晨8点钟(T6) 采集动脉血，并以肝素充分抗凝，立即进行直接免疫荧光染色以流式细胞仪检测CD14+单核细胞表面TLR2、 TLR4和细胞内HSP70表达变化：同时检测各时点血浆TNF-α、IL-6、 IL-10、 NO及MDA。结果：① CON组CD14+单核表面TLR4及细胞内HSP70的表达于T2开始上调，T4达高峰，以后丌始下降，T6仍稍高于诱导前水平。DXM组降低外周血CD14+单核细胞表面TLR4及细胞内HSP70表达(P<0． 05) 。② 两组病人各时点外周血CD14+单核细胞表面TLR2的表达均呈逐渐上升趋势，DXM组较CON组上升幅度较低，T5和T6时点二者差别显著(P<0． 05) 。③ 两个不同组病人FITC-anti-HSP70和PE-anti-TLR2双阳性单核细胞和FITC-anti-HSP70和PE-anti-TLR4双阳性单核细胞均在T4表达高峰，随后逐渐减弱，DXM组阳性率高峰值明显较CON组高峰值低。④ TNF-α浓度在DXM组T3时表达高峰，CON组T4时点表达高峰，DXM组明显低于CON组(P<O．01) ：IL-6浓度在DXM组T4时表达高峰，CON组T5时点表达高峰，DXM组明显低于CON组(P<0． 05) ；两组工L-10浓度均在T5时点表达高峰，DXM组明显高于CON组(P<0． 05) ；DXM组IL-10与TNF-α的比例在T2到T6均较CON组明显升高。⑤ 血浆NO浓度均在T4达高峰，DXM组明显较CON组对应值降低，T4、 T5差别有显著性(P<0． 05) ；血浆MDA浓度均在麻醉诱导后逐渐升高，T6时达高峰；DXM血浆MDA浓度明显降低(P<0． 05) 。结论：① 体外循环时HSP70等地塞米松减轻体外循环后系统性炎性反应与Tofl样受体2、4信号转导通路的关系中文摘要内源性危险信号增加，他们兴奋了TLRZ、4的受体，而激活细胞内信号转导通路，导致系统性炎性反应综合征。②地塞米松可通过减少HSP7O等危险信号产生，或/和直接抑制TLRZ、4受体表达而抑制促炎介质INF一a、工L一6及N0等炎性介质释放增加。地塞米松也可增加IL一10等另外的信号机制产生免疫抑制反应。③TLRZ、4可以作为体外循环后全身炎性反应综合征新的治疗靶点。第二部分:体外循环期间应用地塞米松对犬心、肺、脾及外周血单个核细胞To!14表达影响的实验研究 目的:通过建立犬体外循环模型，以sYBR Green工荧光定量PcR方法，进一步探讨在犬体外循环期间各组织中，特别是心、肺、脾脏及外周血单个核细胞中TLR4基因表达变化的规律，以及地塞米松对上述各组织TLR4基因表达的影响。方法:健康家犬10只，随机分为2组:对照组(c0N组，n二5)和地塞米松组(DXM组，n=5)。麻醉诱导前DXM组给地塞米松lmg/kg，对照组给等体积的生理盐水，麻醉诱导后严格无菌条件下暴露心脏，静脉给肝素4mg/kg，维持ACT大于480秒，经主A根部、右房插管建立体外循环，同时停止机械通气，开始完全体外循环，灌注量为50一70ml/kg，灌注压为50一70mmHg，CPBZ小时后开始升温，心脏复跳，必要时电除颤复律，机械通气，循环稳定后按1.5:1比例给予鱼精蛋白中和肝素，停止体外循环，观察2小时处死动物。分别于体外循环前(T1)、体外循环1小时(T2)、体外循环2小时(T3)、停体外循环30分钟(T4)、停体外循环2小时(TS)切取心、肺、脾等组织o.sc耐大小，放入冻存管后，立即置于液氮中速冻，然后转移到一70℃冰箱保存待用，同时采集动脉血，并以肝素充分抗凝，分离出单个核细胞加Tri 201置于一70℃冰箱备用。另外，血标本15O0rPm离心后分离出血浆lml置于一70℃冰箱，以备检测N0及MDA。标本收齐后行组织匀浆、逆转录、荧光定量PCR测TLR4、TNF~。和HsP70mRNA表达。结果:两组心、肺、脾各组织及PBMC中TLR4mRNA、HSP70mRNA及TNF一a mRNA表达均逐渐增加，肺组织于TZ明显上调(P<0 .01)，而PBMC、心及脾组织于地塞米松减轻体外循环后系统性炎性反应与Toll样受体2、4信号转导通路的关系中文摘要T3出现明显变化(P<0.05)，均于停体外循环2小时达到最高峰，肺组织TLR4mRNA变化较明显，然后是PBMC、心脏组织，最后是脾脏组织。两组血浆NO、MDA浓度均表现从Tl到T6逐渐增加趋势。地塞米松组与对照组相比各组织HSP70mRNA，TLR4mRNA及TNF一a mRNA均表现不同程度下降(P(0.05，或P<0.01)。DXM组血浆NO及MDA浓度从T3到T6均较CON组相应时点值显著降低(P<0.05或P<0 .01)。结论:①犬体外循环过程中系统性炎性反应综合征与多种器官组织TLR4表达上调有关，内源性危险信号如HSP70mRNA等生成增加可能是TLR4的表达的原因。②犬体外循环过程中不同组织TLR4mRNA表达变化有差异性，肺组织TLR4mRNA变化较明显，然后是PBMC、心脏组织，最后是脾脏组织。③地塞米松能明显减轻对体外循环后各器官的炎性反应，对TLR4或/和HSP70的?