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1.芜菁花叶病毒单克隆抗体制备及检测研究 1.1 浙江雪菜花叶病病原鉴定 从浙江宁波雪菜上获得病毒分离物NBXC,摩擦接种8种鉴别寄主。病毒提纯后,经电镜观察,可发现大量长约740nm的线形粒子。利用IC-RT-PCR对病毒分离物NBXC的CP和HC-Pro基因进行PCR扩增,分别得到约0.85kb和1.4kb的两条条带,与预期的芜菁花叶病毒（Turnip mosaic virus,TuMV）的CP和HC-Pro基因大小吻合。扩增产物克隆后进行序列测定,CP基因序列长度为864个核苷酸,编码288个氨基酸;HC-Pro基因序列长度为1374个核苷酸,编码458个氨基酸。NBXC的CP和HC-Pro基因与已报道的TuMV其他分离物的核苷酸序列同源率分别为90.0～98.3%和82.2～96.9%,氨基酸同源率分别为95.8～99.3%和95.6～99.3%。间接酶联免疫吸附法（Indirect ELISA）检测,TuMV的检出率为83.6%,所有的样本都没有检测到黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic ivirus,CMV）和烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）。根据以上试验结果判断:浙江雪菜花叶病的主要病原是TuMV。 1.2 芜菁花叶病毒单克隆抗体制备及检测研究 芜菁花叶病毒（TuMV）免疫BAL B/C小鼠后,取脾细胞与SP2/O鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选、克隆,获得4株能稳定传代并分泌抗TuMV单克隆抗体（MAb）的杂交瘤细胞,并制备腹水单抗。4株单克隆抗体腹水ELISA效价在10-5～10-6之间,仅对TuMV起特异性反应。Western blot分析表明,4株单抗都能与TuMV 34KD的外壳蛋白亚基起特异反应。利用TuMV的多抗兔血清和单抗腹水建立了三抗体夹心ELISA检测TuMV的方法,检测病叶的灵敏度为1:5120倍,检测提纯TuMV病毒绝对量为21.9 ng。利用三抗体夹心ELISA测定出七种作物上有TuMV侵染。 1.3 利用芜菁花叶病毒单克隆抗体测定雪菜品种对TuMV的抗病性 对57个雪菜栽培品种进行温室和大田人工接种,以鉴定其对TuMV抗性。温室和大田接种实验鉴定出抗TuMV的雪菜品种有7个,耐病品种22个,感病品种28