【摘 要】
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目的:探讨α-常春藤皂苷(α-Hederin)调控人胃癌耐药细胞增殖和凋亡的作用及其相关通路。方法:1.构建人胃癌耐顺铂细胞株HGC27/DDP,并应用CCK-8法检测不同浓度梯度(0,0.5,1,2,4,8,16μg/ml)顺铂对人胃癌细胞株HGC27及人胃癌耐药细胞株HGC27/DDP增殖的影响;同时通过CCK-8法检测不同浓度(0,2.5,5,10,15,20,25μmol/L)α-Hede
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目的:探讨α-常春藤皂苷（α-Hederin）调控人胃癌耐药细胞增殖和凋亡的作用及其相关通路。方法:1.构建人胃癌耐顺铂细胞株HGC27/DDP,并应用CCK-8法检测不同浓度梯度（0,0.5,1,2,4,8,16μg/ml）顺铂对人胃癌细胞株HGC27及人胃癌耐药细胞株HGC27/DDP增殖的影响;同时通过CCK-8法检测不同浓度（0,2.5,5,10,15,20,25μmol/L）α-Hederin在24h及48h对HGC27/DDP细胞增殖的影响,明确其半数有效抑制浓度(IC50);Transwell法及划痕实验检测α-Hederin对HGC27/DDP细胞侵袭和迁移的影响;Hoechst 33258染色法及流式细胞术检测α-Hederin对HGC27/DDP细胞凋亡的作用;荧光探针DCFH-DA检测细胞内ROS水平;应用JC-1试剂盒检测HGC27/DDP细胞膜电位变化;采用GSH和GSSG检测试剂盒检测细胞内谷胱甘肽（GSH）含量。2.选用丁光亚磺酰亚胺（BSO）、N-乙酰半胱氨酸（NAC）干预HGC27/DDP细胞GSH合成,应用Hoechst 33258染色检测BSO/NAC对α-Hederin诱导HGC27/DDP细胞凋亡作用的影响;通过检测HGC27/DDP细胞内ROS及线粒体膜电位的变化,以及Western blot法检测凋亡通路蛋白表达情况,分析α-Hederin抗胃癌耐药细胞作用相关机制。3.构建胃癌耐药细胞裸鼠皮下移植瘤模型,裸鼠随机进行分组,以腹腔注射给予不同浓度的α-Hederin,观察并记录裸鼠及瘤体的生长情况;HE染色观察移植瘤组织学特征;TUNEL法检测移植瘤瘤体组织细胞的凋亡情况;通过对裸鼠肝肾功能的检测初步评估α-Hederin安全性。结果:1.CCK-8结果显示,HGC27细胞比HGC27/DDP细胞对顺铂更加敏感,α-Hederin能抑制HGC27/DDP细胞增殖,并呈浓度和时间依赖性,24h及48h的IC50分别为9.339±0.468μmol/L及4.736±0.342μmol/L;随着α-Hederin浓度增加,Transwell法、划痕实验及Western Blot结果显示HGC27/DDP细胞侵袭及迁移能力下降;Hoechst 33258染色后镜下可见细胞核出现明显核固缩、核碎裂及染色质浓集等凋亡相关改变,流式细胞术显示随着α-Hederin浓度增加,HGC27/DDP细胞凋亡比例明显增加（P<0.05）;同时,α-Hederin能引起HGC27/DDP细胞内ROS蓄积,GSH耗竭以及线粒体膜电位的降低。2.应用BSO（8mmol/L）或NAC（12mmol/L）预处理细胞,然后给予α-Hederin（10μmol/L）作用。Hoechst 33258染色结果显示,NAC预处理显著抑制α-Hederin对HGC27/DDP细胞的凋亡促进作用,而BSO预处理作用相反。HGC27/DDP细胞内ROS及线粒体膜电位检测结果显示,NAC预处理能减少细胞体内ROS蓄积,提高线粒体膜电位水平,而BSO预处理作用相反。Western Blot结果显示,随着α-Hederin浓度增加,Bax、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、Apaf-1、AIF及Cyt C蛋白表达水平增加（P<0.05）,而Bcl-2和PCNA蛋白表达水平降低（P<0.05）。BSO预处理使细胞内Bax、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、Apaf-1、AIF及Cyt C蛋白表达量增加（P<0.05）,Bcl-2和Survivin蛋白表达量减少（P<0.05）,NAC预处理结果则相反。3.构建裸鼠皮下成瘤模型,腹腔注射生理盐水、α-Hederin 2mg/kg、α-Hederin 4mg/kg和α-Hederin 6mg/kg,与对照组相比,瘤体重量及体积均明显逐渐减小（P<0.05）,HE染色观察组织学形态结果显示,α-Hederin组肿瘤细胞核较大,胞浆欠丰富,胞核致密且浓染细胞数目更多,可见核分裂像;TUNEL检测显示,且随着α-Hederin浓度的增加,凋亡细胞比例增多;裸鼠移植瘤研究的体内实验中,相比对照组,α-Hederin各浓度组裸鼠的肝、肾功能无明显差异（P>0.05）。结论:α-常春藤皂苷通过细胞内活性氧介导的线粒体途径抑制胃癌耐药细胞增殖并诱导其凋亡。
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