第一章常见深部念珠菌快速鉴定方法的建立第一节常见深部念珠菌PCR-RFLP方法的建立目的建立常见深部念珠菌的PCR-RFLP方法。方法对6种念珠菌标准株(包括白念珠菌、克柔念珠菌、近平滑念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌和季也蒙念珠菌),使用引物PR1-PR3扩增ITS1-ITS2区。按照rDNA-ITS-RFLP方法采用不同酶进行酶切,比较酶切带型图,选择最佳的酶切方案,鉴别常见6种念珠菌。结果应用MSPI或者HhaⅠ+HaeⅢ进行酶切反应,6种念珠菌标准株的酶切带型有明显差异,易于鉴别。结论使用MSPI或者HhaⅠ+HaeⅢ进行酶切,可以通过一次反应,鉴别出常见的6种致病念珠菌,为临床念珠菌的快速准确诊断赢得时间。第二节常见深部念珠菌多重PCR快速鉴定方法的建立目的为了快速准确鉴定深部感染常见的6种念珠菌,建立一种多重PCR技术。方法对6种念珠菌包括白念珠菌、克柔念珠菌、近平滑念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌和季也蒙念珠菌标准株,通过2条通用引物和6条种特异性引物扩增ITS1-ITS2区DNA序列,初步建立6种念珠菌的多重PCR检测方法。并与CHROMagar’快速显色法结果进行比较。结果CHROMagar’快显色法可用于念珠菌初步分离和鉴定,只能对白念珠菌、热带念珠菌和克柔念珠菌进行较好鉴别。而多重PCR反应可以将每种念珠菌扩增出通用和特异性两个条带,易于区别。结论多重PCR方法可一次鉴定出常见的6种致病念珠菌,与传统CHROMagar快速显色法相比,快速准确,具有一定的实用性。第二章念珠菌临床致病株鉴定及临床分析第一节念珠菌临床致病株多重PCR鉴定目的使用多重PCR方法鉴定临床念珠菌病标本。方法收集2009年度念珠菌临床株共50株。分别应用传统CHROMagar’陕速显色法和多重PCR方法对这些念珠菌临床致病株进行鉴定。以ITS区测序鉴定作为金标准,比较这两种念珠菌鉴定方法。结果CHRO Magar快速显色法判断准确37株,准确率74%；多重PCR能快速准确鉴定临床最常见的6种致病念珠菌(白念珠菌、克柔念珠菌、近平滑念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌、季也蒙念珠菌),判断准确46株,准确率92%,且未判出的4株菌不在本诊断体系之中。结论多重PCR方法的确能快速准确鉴定临床最常见的6种致病念珠菌,总体而言优于传统的CHROMagar诊断方法。第二节临床致病念珠菌感染分析目的通过对真菌检验室收集念珠菌临床致病株的鉴定,分析不同念珠菌种临床致病株分布和发病特点。方法收集中国医学科学院皮肤病研究所真菌检验室2009年度念珠菌临床标本,分别应用传统方法和分子方法进行鉴定。结合患者性别、年龄、患病部位等一般资料,初步分析不同念珠菌种临床致病株的分布和发病特点。结果收集到临床致病念珠菌50株,其中白念珠菌28株(56%),非白念珠菌中,近平滑念珠菌的比例最高(18%)。另外还发现一些少见念珠菌临床致病的情况,如涎沫念珠菌、耶罗维亚解脂酵母、希木龙念珠菌。结论白念珠菌仍然是最常见的致病念珠菌,但非白念珠菌中近平滑念珠菌的感染比例也较高。念珠菌种的鉴定对指导临床治疗具有很大意义。第三章近平滑念珠菌的WO形态转换观察目的观察近平滑念珠菌在不同培养基的形态转换现象,以及温度对其形态转换的影响。方法收集近平滑念珠菌正常人皮肤携带株及临床致病株和标准株,接种于改良Lee培养基和含桃红B的YPD培养基,观察其不同形态转换,以及温度变化对光滑(W)与皱褶(O)形态转换的影响。结果近平滑念珠菌在Lee培养基和含桃红B的YPD培养基上,均可以出现多种形态以及一定频率W-O转换现象。在观察W向O形态转换过程中发现,与25℃培养温度相比,37℃条件下光滑菌落形态占更多的比例。结论近平滑念珠菌体外培养时存在形态转换及W-O转换现象,且于37℃时更易保持光滑形态。含桃红B的YPD培养基也可以用于基本的W-O形态转换观察。