【摘 要】
：
目的：肺癌转移相关蛋白1 （lung cancer metastasis related protein 1, LCMR1）的编码基因是我们实验室采用差异显示技术克隆到的新基因（GenBank ID:AY148462）,目前其生物学功能不明确。本实验拟通过蛋白蛋白相互作用研究,寻找与LCMR1相互作用的蛋白,为进一步研究LCMR1基因的功能及其在肺癌发生、发展中的作用提供线索和分子基础。方法：（1
论文部分内容阅读
目的：肺癌转移相关蛋白1 （lung cancer metastasis related protein 1, LCMR1）的编码基因是我们实验室采用差异显示技术克隆到的新基因（GenBank ID:AY148462）,目前其生物学功能不明确。本实验拟通过蛋白蛋白相互作用研究,寻找与LCMR1相互作用的蛋白,为进一步研究LCMR1基因的功能及其在肺癌发生、发展中的作用提供线索和分子基础。方法：（1）将诱饵质粒pGBKT7-LCMR1转化入酵母菌,检测诱饵质粒有无转录激活活性和宿主毒性,鉴定BD-LCMR1融合蛋白的表达情况。（2）以95D细胞总RNA为模板,采用SMART技术在逆转录酶的作用下合成cDNA第一链,使用长距离PCR扩增ds cDNA片段。（3）将诱饵质粒pGBKT7-LCMR1、95D细胞cDNA文库片段及线性化质粒pGADT7-Rec共转化酵母菌AH109,用营养缺陷型培养基初步筛选阳性克隆。（4）通过反复划线培养及重复检测报告基因激活等方法,去除假阳性克隆。（5）提取阳性克隆质粒,分离并扩增单个文库质粒。将pGBKT7-LCMR1诱饵质粒和单个文库质粒共转化酵母菌AH109,验证其相互作用。（6）回复验证为阳性的质粒测序并进行生物信息学分析。（7）应用免疫共沉淀（CO-IP）技术在细胞内对酵母双杂交结果进行验证,确认蛋白质相互作用。（8）应用融合蛋白沉降（GST pull-down）技术在体外对其结果进一步验证,确定蛋白质相互作用。结果：（1）诱饵质粒pGBKT7-LCMR1测序鉴定正确,经检测诱饵质粒无自激活作用和宿主毒性,Western blot实验证实诱饵质粒可在酵母中正确表达融合蛋白BD-LCMR1. （2）以95D细胞总RNA为模板合成ds cDNA,产物纯化后经1.2%琼脂糖凝胶电泳鉴定,观察到一条明亮的弥散状条带,大小在250bp～6000bp,符合文库构建要求。（3）应用酵母双杂交技术初步筛选到6种蛋白与LCMR1存在相互作用,选取其中3种蛋白（RPL29、GNG5、DEK）进行后续验证与研究。（4）应用免疫共沉淀（CO-IP）技术及融合蛋白沉降（GSTpull-down）技术在细胞内和在体外对酵母双杂交结果进行验证,确定RPL29与LCMR1有相互作用,DEK与LCMR1有相互作用,GNG5与LCMR1无相互作用。结论：（1）重组质粒pGBKT7-LCMR1无自激活作用和宿主毒性,能够在酵母细胞中正确表达,可作为酵母双杂交系统的诱饵质粒。（2）成功构建95D细胞cDNA文库,可用于酵母双杂交系统文库筛选。（3）应用酵母双杂交技术初步筛选到6种蛋白与LCMR1存在相互作用。（4）选取其中3种蛋白（RPL29、GNG5、DEK）,采用细胞内和体外实验进行验证,最终确定RPL29与LCMR1有相互作用,DEK与LCMR1有相互作用,为研究LCMR1基因的功能和分子机制奠定了基础。
其他文献
中国有一条古训:"治天下者以史为鉴"。古代先哲提出这样的治国理念,是因为他们从朝代更迭中认识到前车之覆、后车当鉴的大道。从1921年到2021年,中国共产党走过了100年的光辉历程。百年来,中国共产党从50多人的政党发展成世界最大的马克思主义执政党,中华民族从积贫积弱到站起来、富起来、强起来。
[研究背景与目的]了解按我国2006年新的Barrett食管（BE）诊治共识意见要求所进行的常规胃镜检查时BE的检出率,各类型BE的比率情况及病理特征,与以往我国BE类似研究资料对比是否有新的变化;针对BE诊断中尤其是SSBE诊断中出现的难点,如SSBE与贲门部IM的区别,从组织粘液化学染色显示的肠化类型,细胞角质蛋白（CK）CK7/CK20免疫组化染色表达的不同及与GERD及Hp感染的关系等方面
在医院经营期间,行政办公室占据主导地位,各个单位的综合办公室,本身都属于整个单位的综合行政管理部门,因此,对于医院行政办公室而言,必须明确认识到自身的职能,在了解特征的基础上实施精细化管理,以此促进医院良好经营。
适量饮用咖啡有益于人体健康，然而，喝咖啡对糖尿病患者血糖和胰岛素水平的影响目前仍存在争议。已有许多流行病学和临床试验研究了咖啡的频繁饮用与2型糖尿病发病风险之间的关系。事实上，咖啡是人类饮食中绿原酸的主要来源，绿原酸和其他酚类化合物通过干扰葡萄糖转运抑制葡萄糖的吸收并增加胰岛素的敏感性。然而，短期试验证实了由于咖啡因的存在，大量饮用咖啡对机体健康的损害，咖啡因会损害葡萄糖耐量且降低胰岛素的敏感性。
北京冬奥会是“两个一百年”奋斗目标历史交汇期的重大标志性活动，是展现国家形象、促进国家发展、振奋民族精神的重要契机。习近平总书记先后五次实地考察北京冬奥会、冬残奥会筹办备赛情况，多次作出重要讲话和重要指示批示，为人民日报冬奥会报道工作指明了方向，提供了根本遵循。人民日报高度重视北京冬奥会报道，始终紧扣习近平总书记提出的“绿色、共享、开放、廉洁”的办奥理念和“简约、安全、精彩”的办赛要求，全面
"一国两制"由科学构想变成生动现实,饱经沧桑的香港、澳门先后回到祖国怀抱,走上了与祖国同呼吸共命运的繁荣发展道路。一部中国近代史写满被侵略、被宰割、被凌辱的字眼,也写下中国人民为维护国家独立和民族尊严而英勇奋斗的壮丽诗篇。从新中国成立的第一天起,中国共产党就把实现祖国统一作为自己的神圣使命,并为之作出了种种努力,为国家统一大业的完成奠定了坚实的基础。
报道了重庆市兰科1新记录种——离萼杓兰（Cypripedium plectrochilum Fraanch.）,并对其形态进行详细的描述。离萼杓兰主要特征为：植株较小；侧萼片完全离生；唇瓣白色而有粉红色晕，深囊状，倒圆锥形，囊口周围具短柔毛。
兰属植物观赏价值极高，在我国已有一千多年的栽培历史，西藏兰属植物资源丰富，摸清西藏兰属植物本底资源，可对今后培育观赏园艺品种提供基础资料。本文报道了兰科兰属植物4个西藏新记录种：莎叶兰（Cymbidium cyperifolium Wall. ex Lindl.）、福兰（C. devonianum Paxton）、春兰[C. goeringii （Rchb. f.） Rchb. f.]和大雪兰（C
奥古斯都·波瓦建构了一种以观演者为中心的剧场空间，他在布莱希特的基础上更彻底地瓦解了“第四堵墙”。基于平等的介入理念，波瓦重构了剧场空间中演员与观众的位置权力关系，旨在激发参与者的主动性，使其不再是被动观看的观众，并且通过自身的行动来唤醒自己的主体性。其目的在于通过平等的观演关系来消除戏剧介入中启蒙者与被启蒙者之间的二元对立，把剧场内部的平等推向社会。波瓦的戏剧介入关注到了具身性经验中所存留的身体