消癌平注射液为萝藦科牛奶菜属植物通关藤Marsdenia tenacissima (Roxb.) Wight etArn.]的根、藤茎经提取制成的水溶液。具有清热解毒,化痰软坚等功效,临床上主要用于治疗肺癌、肝癌、食道癌、胃癌等各种恶性肿瘤具有良好疗效,此外消癌平注射液联合放、化疗治疗晚期鼻咽癌、卵巢癌、耄耋年龄淋巴瘤等。消癌平注射液在临床上疗效明确,且应用广泛,但目前其相关研究多基于临床观察与应用,消癌平注射液多种成分、活性成分的含量测定及其活性成分药代方面研究较为匮乏。因此了解消癌平注射液在临床上常与其它药物合用,可能引发不良反应。本文试图通过消癌平注射液的含量测定为基础,对细胞P450的影响和相互作用研究及注射液中主要成分的药代动力学研究,为消癌平注射液在临床上用药的安全性提供参考依据。第一章HPLC法同时测定消癌平注射液中七种主要成分的含量目的：测定消癌平注射液中新绿原酸,原儿茶醛,绿原酸,隐绿原酸,咖啡酸,香草酸和4-香豆素的含量。方法：色谱柱为Kromasil100-5C18(4.6X250mm,5μm)；流动相为乙腈-0.2%磷酸,梯度洗脱；检测波长为300nm；柱温为30℃；流速为0.8mL·min-1。结果：新绿原酸,原儿茶醛,绿原酸,隐绿原酸,咖啡酸,香草酸和4-香豆酸的线性范围分别为0.1～3.2mg·L-1(r=0.9993),0.025～0.8mg·L-1(r=0.9999),0.1～3.2mg·L-1(r=0.9998),0.075～2.4mg·L-1(r=0.9999),0.0375～1.2mg·L-1(r=0.9999),0.02～0.64mg·L-1(r=0.9999),0.01～0.32mg·L-1(r=0.9999),加样回收率分别为99.6%(RSD0.24%),100.0%(RSD0.15%),98.7%(RSD1.00%),99.1%(RSD1.36%),96.4%(RSD1.37%),98.3%(RSD1.80%),97.3%(RSD1.64%)。结论：该方法简便,准确,重现性好,可为消癌平注射液提供质量控制依据。第二章LC-MS法测定消癌平注射液中两种活性成分的含量目的：建立同时测定消癌平注射液中两种甾体皂苷17β-tenacigenin B和tenacigenoside A含量的液相色谱-质谱联用法。方法：色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18(3.0×100mm,3.5pm);保护柱为Agilent Zorbax SB-C18(2.1×12.5mm,5μm);流动相为甲醇-水(90：10)；流速为0.25mL·min-1。甲睾酮为内标,质谱采用电喷雾离子化(ESI)方式,正离子采集,以选择离子反应监测(SIR)模式对两种甾体皂苷进行含量测定。结果：17β-tenacigenin B和tenacigenoside A的线性范围分别为0.625-20mg-L-1(r=0.9983),0.375～12mg·L-1(r=0.9994),加样回收率分别为100.8%(RSD3.95%),101.6%(RSD2.71%)。结论：该方法简便,准确,重现性好,可为消癌平注射液提供质量控制依据。第三章消癌平注射液中2种活性成分在大鼠体内的药代动力学研究目的：建立LC-MS法同时测定大鼠血浆中17β-tenacigenin B和tenacigenoside A单体在大鼠体内的药代动力学。方法：色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18(150×2.1mm,5μm);预柱为Agilent Zorbax SB-C18(12.5×2.1mm.5μm),流动相为甲醇-水(90：10)。8只雄性健康大鼠,分别尾静脉注射17β-tenacigenin B和tenacigenoside A,采用LC-MS检测血浆中各指标成分的浓度,以DAS程序拟合各成分的药代参数。结果：17β-tenacigenin B和tenacigenoside A在检测范围内线性关系良好(r>0.996),两个成分日内和日间精密度RSD均低于5.7%。大鼠尾静脉注射消癌平注射液后,2个成分药时曲线符合二室模型。结论：本文所建立方法简便、灵敏、稳定、可靠,适用于大鼠血浆中药物浓度的测定。单体药代参数不能代表单体在制剂中药代动力学行为。第四章消癌平注射液对大鼠肝S9蛋白与细胞色素P450含量的影响目的：研究消癌平注射液对大鼠肝S9蛋白与细胞色素P450含量的影响。方法：将20只SD大鼠随机分为空白对照组、阳性对照组(苯巴比妥钠80mg-kg-1)、消癌平注射液正常剂量组(6mL·kg-1)高剂量组(12mL·kg-1)。口服连续给药10天,制备大鼠肝S9,Lowry法测定蛋白浓度,分光光度法测定肝S9细胞色素P450酶含量。单因素方差分析进行统计。结果：两种剂量消癌平注射液对大鼠肝重指数和肝S9蛋白含量影响都不显著(P>0.05),临床等效剂量与高剂量消癌平注射液对肝S9细胞色素P450含量均有显著影响(P<0.05),且高剂量消癌平注射液与临床等效剂量对肝S9细胞色素P450含量两者相比无显著性差异(P>0.05)。结论：临床等效剂量和高剂量消癌平注射液对大鼠肝S9中细胞色素P450可能有诱导作用。第五章消癌平注射液对大鼠CYP450酶亚型的影响目的：建立同时测定大鼠全血中6种CYP450探针药物,即茶碱(CYP1A2).甲苯磺丁脲(CYP2C9).奥美拉唑(CYP2C19).右美沙芬(CYP2D6).氯唑沙宗(CYP2E1)和咪达唑仑(CYP3A4)的方法,并采用Cocktail法快速评价消癌平注射液CYP450同工酶的影响。方法：8只大鼠连续10天给予消癌平注射液(临床剂量,6mL·kg-1)前后,均同时灌胃给予6个探针底物(甲苯磺丁脲,20mg·kg-1；氯唑沙宗40mg·kg-1；茶碱25mg·kg-1；咪达唑仑20mg·kg-1；奥美拉唑40mg·kg-1；右美莎芬30mg·kg-1),采血测定。用LC-MS/MS法同时测定大鼠体内各探针的血药浓度,DAS1.0软件计算药动学参数,并以配对t检验对大鼠前后两轮主要药动学参数进行比较。结果：临床剂量组大鼠给药后,与给药前相比,茶碱的药动学参数无显著性变化(P>0.05)；甲苯磺丁脲的AUC0-24h与给药前相比,有降低趋势(P<0.05)；氯唑沙宗、咪达唑仑、奥美拉唑、右美莎芬的AUC0-24h与给药前相比,有升高趋势(P<0.05)。结论：连续给药10天临床剂量消癌平注射液对大鼠CYP1A2活性无显著性影响；而临床剂量消癌平注射液对大鼠CYP3A4. CYP2D6.CYP2C19和CYP2E1有抑制作用；对CYP2C9有诱导作用。第六章消癌平注射液合用昂丹司琼注射液对大鼠体内昂丹司琼药动学的影响目的：研究消癌平注射液合用昂丹司琼注射液对大鼠体内昂丹司琼的药动学影响。方法：8只大鼠连续10天腹腔给予消癌平注射液(6mL·kg-1),并在第1天给予消痛平注射液前与第10天给予消癌平注射液后均同时灌胃给予昂丹司琼(4mg·kg-1),用HPLC法测定大鼠体内昂丹司琼的血药浓度,计算药动学参数,并以配对t检验对两组大鼠前后两轮主要药动学参数进行差异性比较。结果：消癌平注射液与昂丹司琼联用后,昂丹司琼的t1/2值较单用时明显增加(p<0.05),而Cmax,AUC0-t则显著减少(p<0.05),其余各药动学参数无显著性差异。结论：消癌平注射液与昂丹司琼联合用药会降低昂丹司琼的血药浓度,可能导致其止吐作用的减弱从而使癌症患者的生活质量下降,不良反应加大。