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目的:吉兰-巴雷综合征(Guillain-BarreSyndrome,GBS)是一种自身免疫性疾病,目前病因和发病机制尚不十分清楚。实验性变态反应性神经炎(experimentalallergicneuritis,EAN)是一种自身抗原特异性、由T细胞介导的炎症性周围神经病,是研究GBS的理想动物模型。髓系细胞触发受体-1(triggeringreceptorexpressedonmyeloidcells1,TREM-1)是最新发现的一种细胞表面天然免疫受体,在天然免疫和后天免疫中有重要作用。细胞因子有参与免疫应答与免疫调节的作用,IL-1β和TNF-α都是单核细胞炎性细胞因子,以往研究表明两者均与EAN的发生有关。
本实验应用该抑制性LP-17,即TREM-1拮抗剂对EAN的发病进行干预,观察其对EAN大鼠发病的影响,并检测TREM-1,IL-1β、TNF-α在EAN大鼠坐骨神经和外周血中的动态表达,旨在发现EAN中是否存在TREM-1的表达异常,探讨TREM-1在EAN中的作用,为寻找新的治疗自身免疫性疾病的策略奠定理论基础。
方法:64只Lewis大鼠,SPF级,雄性,6-8周,体重160-180g,随机分为:生理盐水组、完全弗氏佐剂组、EAN组、LP17干预组。
EAN模型的建立:首先制备抗原乳剂,其流程如下:以NS溶解大鼠用周围神经髓鞘蛋白P253-78,再与完全弗氏佐剂充分混匀成乳剂(其中P2浓度为200μg/200μL);各组处理如下:NS组大鼠以NS代替抗原乳剂注射(200μL/只);EAN组每只大鼠注射200μL抗原乳剂,佐剂组大鼠以NS和CFA等体积混匀的乳剂200μL注射,LP17干预组大鼠免疫同时给予腹腔注射LP17(4mg/kg)500ul。免疫部位为:双后肢足掌皮下。
观察实验大鼠的发病情况,分别在第7天,第16天,第24天,第33天处死动物,取坐骨神经根经HE染色和weils染色观察其病理改变,RT-PCR检测TREM-1、IL-1β和TNF-α的mRNA表达水平。
结果:EAN组大鼠在免疫后第16天症状达高峰,第33天基本好转。LP17干预组大鼠临床症状比EAN组明显降低,且病程缩短。与对照组相比,EAN组大鼠TREM-1mRNA在发病初即表达增高(p<0.05),高峰期上升明显(p<0.01),在恢复早期和恢复晚期表达回落,但仍高于NS组(p<0.05);与对照组相比,EAN组大鼠各组织各时间点IL-1β和TNF-αmRNA表达均升高,LP17干预组IL-1β和TNF-α表达较EAN组均下降,与前后时间点相比有差异(p<0.05)。CFA组和NS组大鼠无症状,CFA组与NS组相比,TREM-1、IL-1β和TNF-α的表达无明显差异。
结论:1、TREM-1可能参与EAN的发病;2、用LP17阻断TREM-1可减轻EAN大鼠的临床症状评分。