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在畜禽养殖业不断发展的今天,通过疫苗免疫来控制疾病的发生是非常重要且有效的手段,但是免疫失败或不完全成功的情况时有发生,其原因众多,除疫苗质量、免疫程序等因素外,机体健康状况不良、感染免疫抑制性疾病、应激、滥用药物引起慢性中毒等都可以导致畜禽处于亚健康状态,而不能对疫苗刺激作出正常的免疫应答,从而导致免疫失败或不完全成功。同时近年来伴随分子生物学技术的发展而涌现出的基因疫苗,因其本身免疫原性差,一般免疫增强剂难以提高其免疫原性。因此研制高效、低毒的新型免疫增强剂己成为亟待解决的问题。植物血凝素(Phytohemagglutinin,PHA)作为一种有丝分裂原,对机体的免疫系统有极强的刺激作用。本文对PHA的提取工艺进行了研究。根据影响传统水溶液浸提的各因素设计了3组水溶液浸提方案,同时采用反胶团法提取PHA,将二者进行比较,结果发现反胶团萃取的血凝效价和蛋白提取率高于水溶液浸提组,说明反胶团萃取具有较高的提取率。对影响反胶团萃取的各因素(pH、水相离子强度、萃取时间)进行单因素分析,找到反胶团萃取PHA的最佳工艺:水相离子强度为0.15mol·L-1,正萃时水相pH4～6,萃取时间为4min,反萃时水相pH为9～10,萃取时间8min。采用DEAE Sephadex A-50和Sephadex G150对PHA进行纯化,纯化产物经SDS-PAGE电泳进行分析,结果显示获得单一条带,说明获得电泳纯的PHA。中药多糖(Chinese Herbal Polysaccharides,CHPs)的免疫增强作用已被多方面的实验所证实。本文采用水提醇沉法提取黄芪多糖(Astragalus Polysaccharides,APS)、板蓝根多糖(Indigowoad Root Polysaccharides,IRP)、茯苓多糖(Poria Wolf Polysaccharides,PWP)、当归多糖(Angelica Sinensis Polysaccharides,ASP),并采用Sevag法除蛋白,大孔树脂脱色素,苯酚-硫酸法对各多糖的含糖量进行检测,结果显示四种多糖的含糖量分别为86%、72%、79%、83%。采用小鼠脾淋巴细胞体外增殖实验观察自提PHA对淋巴细胞的刺激作用,发现PHA终浓度在6.5～200μg·mL-1时能显著促进脾淋巴细胞的增殖,在50μg·mL-1时达最大值,以后随浓度增大而略有下降。观察自提多糖单独或与PHA(亚适剂量12.5μg·mL-1)联用对脾淋巴细胞增殖的影响,结果表明四种多糖单独应用均能促进淋巴细胞增殖,与PHA联用能起到协同作用。其中APS单独或与PHA联用的OD570最高值均最大,因此认为APS对免疫细胞的刺激作用最强。检测APS与PHA联用对小鼠免疫功能的影响。昆明种小白鼠60只,随机分为6组,分别为高、中、低剂量组,PHA对照组,APS对照组和空白对照组。腹腔注射,连续5d,第7d用碳廓实验检测小鼠的MФ吞噬指数,并计算脾指数和胸腺指数。结果表明APS与PHA联用的中、高剂量能显著或极显著地提高小鼠的脾指数,对胸腺指数影响不显著;APS与PHA联用中、高剂量组均能极显著提高小鼠的MФ吞噬指数,证明APS与PHA联用对小鼠的特异性免疫系统和非特异性免疫系统均有促进作用。综上所述,反胶团法萃取PHA效果较好,同时自提PHA与APS联用对机体的特异性和非特异性免疫功能均有促进作用。