冷应激下O-GlcNAc对小鼠骨骼肌卫星细胞相关营养代谢的影响

来源 :黑龙江八一农垦大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Eltonxin
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O-连接的N-乙酰葡糖胺糖基化修饰(O-GlcNAcylation,O-GlcNAc)是一种存在于蛋白质Ser/Thr上的翻译后修饰,主要是由O-GlcNAc催化转移酶(OGT)和O-GlcNAc水解酶(OGA)调控的动态过程。其过程与磷酸化相似,在多种细胞过程中扮演着重要的信号转导通路角色,并与神经退行性疾病、Ⅱ型糖尿病、癌症等许多疾病的发病机理密切相关。Ogawa等人研究发现,O-连接的N-乙酰葡萄糖胺(O-GlcNAc)的蛋白质糖基化修饰在骨骼肌生长发育和生理功能中起着重要的作用,并且不适当的O-GlcNAc糖基化会损害肌纤维的形成,并诱导肌肉萎缩,但其作用机制还有待考究。在寒冷的北方,冷应激条件下O-GlcNAc会对骨骼肌产生怎样的影响呢?因此我们在冷应激条件下,通过抑制剂来调控OGT和OGA两种酶的活性,间接调控小鼠骨骼肌卫星细胞内O-GlcNAc的含量,来探讨O-GlcNAc对小鼠骨骼肌卫星细胞相关代谢的作用。这一研究发现将有助于我们更好地了解寒冷条件对肉类品质产生的影响。实验方法:(1)小鼠骨骼肌卫星细胞的培养及鉴定方法:采用两步酶消化法培养细胞,利用结蛋白(desmin)对细胞进行免疫荧光染色鉴定。(2)冷应激对小鼠骨骼肌细胞中O-GlcNAc蛋白调控的影响:体内辅助实验,将小鼠随机分为空白对照组(21±0.1℃)、冷应激(4±0.1℃)4h、冷应激(4±0.1℃)8h三组;体外实验是将细胞分为空白对照组、OGT高表达组、OGA高表达组,分别在37℃和32℃下处理,通过Western Blot和荧光定量PCR方法进行检测。(3)O-GlcNAc对冷应激下小鼠骨骼肌细胞的作用:仍将细胞分为空白对照组、OGT高表达组、OGA高表达组,分别在37℃和32℃下处理,通过ELISA方法检测细胞凋亡、氧化还原、能量代谢等相关指标,来验证O-GlcNAc对冷应激下小鼠骨骼肌卫星细胞的作用。实验结果:(1)成功培养并鉴定出小鼠骼肌卫星细胞,且状态良好。(2)在体内和体外实验中,冷应激后通过Western Blot检测出O-GlcNAc所调控的蛋白表达量减少,荧光定量PCR检测出OGT的mRNA表达量减少,OGA的mRNA表达量增多。(3)通过ELISA方法检测细胞凋亡、氧化还原、能量代谢等相关指标,表明冷应激下O-GlcNAc对小鼠骨骼肌卫星细胞具有一定的调控作用。实验结论:冷应激后,体内和体外实验中O-GlcNAc所调控的蛋白表达量减少,OGT的mRNA表达量减少,OGA的mRNA表达量增多;小鼠骨骼肌卫星细胞在冷应激下,所检测的相关指标也发生了相应变化,说明O-GlcNAc在小鼠骨骼肌卫星细胞冷应激损伤中发挥了一定的调控作用,提示冷应激下O-GlcNAc的减少可能是动物骨骼肌冷应激损伤的诱发因素之一。
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