间充质干细胞-TRAIL复合物促胰腺癌细胞凋亡的实验研究

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背景与目的:胰腺癌是恶性程度很高的实体肿瘤,预后差,发病年龄呈年轻化趋势。目前临床上治疗胰腺癌主要依赖于手术切除,但由于胰腺癌发病部位隐匿,易局部扩散和早期转移,大多数病人在就诊时即已处于晚期,失去了手术切除机会。化疗和放疗治疗胰腺癌效果均较差,其主要原因就在于现行放化疗措施缺乏对肿瘤的特异针对性。间充质干细胞(mesenchymal stem cell, MSC)是一种能分化成多种细胞的成体多能干细胞,新近研究发现MSC除了自我更新与多向性分化功能之外,还具有肿瘤定向性迁移与定居的特性。这种特性使MSC能够定居于肿瘤组织内,无论是原发性肿瘤还是转移瘤,即便是常规检测手段不能发现的微小病灶也逃脱不了MSC的追踪。TRAIL(肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体,TNF-related apoptosis—inducing ligand)是继TNF、FasL之后发现的第三个TNF家族的凋亡分子。TRAIL与其受体结合可以启动细胞内的信号转导,在体外可以诱导多种肿瘤细胞株的凋亡,而正常组织对其不敏感。目前五个不同的TRAIL受体已经被确定,死亡受体DR4和DR5介导细胞凋亡信号转导,而三个诱骗受体:DcR1、DcR2和OPG则阻碍细胞凋亡信号转导,从而抑制TRAIL介导的细胞凋亡。本实验旨在构建间充质干细胞—TRAIL这种细胞—抗肿瘤基因复合物,并且将复合物与肿瘤细胞共培养,观察其对能否诱导肿瘤细胞的凋亡,从而为研究用于胰腺癌治疗的新型细胞-基因双重靶向疗法提供实验基础和依据。材料与方法:选择健康志愿者骨髓穿刺标本,分离纯化MSC,原代培养并进行相关鉴定。使用Mirus公司的Trans IT-2020将TRAIL基因转导至MSC中,构建MSC—TRAIL复合物,且采用RT-PCR法验证。常规培养胰腺癌细胞株,流式细胞术测定细胞表面DR4及DR5受体的表达水平。将MSC-TRAIL复合物与胰腺癌细胞共培养,检测MSC的细胞迁移率及诱导胰腺癌细胞凋亡水平。结果:(1)流式细胞术检测MSC表面标志物,诱导MSC定向分化,成功分离和纯化原代MSC;(2)RT-PCR验证转染的TRAIL基因在MSC中有表达;(3)流式细胞术验证胰腺癌细胞株有DR4/DR5受体的表达;(4)MSC有向胰腺癌细胞定向移动的能力,MSC-TRAIL复合物在体外与胰腺癌细胞株共培养,可促进胰腺癌细胞凋亡。结论:MSC有向胰腺癌细胞定向移动的能力;MSC-TRAIL复合物在体外与胰腺癌细胞株共培养,可促进胰腺癌细胞凋亡。
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