金花茶叶对CCl4诱导急性肝损伤大鼠的保护作用及中等极性化学成分对照品研究

来源 :广西医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:caoxiao771
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
金花茶[Camellia petelotii(Merrill)sealy(C.petelotii)]来源于山茶科(Theaceae)山茶属植物的叶,为国家一级保护植物,主要分布在广西、越南等地。野生的金花茶数量极其稀少且分布狭窄,是世界上稀有的珍贵植物。目前金花茶已经在广西防城港大面积培育成功。金花茶有着“东方魔茶”、“植物界大熊猫”、“茶族皇后”等美称,不仅因其美观性,更因其有着极高的药用价值。金花茶作为一种药食同源的植物,收载于《广西壮族自治区壮药标准第二卷》,其叶常用于治疗咽喉疼痛、鼓胀、水肿、小便不利、疮疡、泄泻、痢疾等。现代药理学表明,金花茶叶提取物具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化、调节血脂血糖血压等药理活性。据文献报道,目前已从金花茶叶中分离鉴定出多种化学成分,主要有皂苷类、黄酮类、酚酸类、生物碱等种类的化合物。目的:本研究旨在探讨金花茶叶对ALI(Acute liver injury,急性肝损伤)大鼠的保护作用以及其中等极性化学成分对照品,为金花茶叶护肝功能产品的研究与开发提供药理学基础和化学成分对照品。方法:1.用10%乙醇提取金花茶叶,减压回收,冷冻干燥,得CPE(C.petelotii leaves aqueous ethanol extract,金花茶叶乙醇提取物)冻干粉,并通过分光光度法测定CPE中多酚和总黄酮的含量。2.将雄性SD大鼠随机分为六组(n=10):正常组和阴性组(0.5%CMC-Na,5 ml/kg/d),Tiopronin组(20 mg/kg/d)和CPE组(40,80和160 mg/kg/d)。所有组均连续给药7天,在第7天给药后的1 h,正常组大鼠腹腔注射橄榄油。除正常组外,其余所有组的大鼠均腹腔注射CCl4(2 ml/kg,溶解于橄榄油,50%,v/v)。空腹14 h(自由饮水)后,取血和肝脏。采用H&E(Hematoxylin&Hosin,苏木精&伊红)染色进行组织学检查,观察各组大鼠的肝脏病理学改变;使用试剂盒检测血清和肝脏组织中的AST(Aspartate transaminase,谷草转氨酶)、ALT(Alanine aminotransfease,谷丙转氨酶)和MDA(Malondialdehyde,丙二醛)的含量,检测肝组织中的SOD(Superoxide dismutase,超氧化物歧化酶)和GSH(Glutataione,谷胱甘肽)的含量;使用ELISA(Enzyme-linked immunosorbent assay,酶联免疫吸附法)试剂盒检测大鼠血清中ROS(Reactive oxygen species,活性氧)含量以及TNF-α(Tumor necrosis factor-α,肿瘤坏死因子-α)、IL-1β(Interleukin-1β,白细胞介素-1β)、IL-6(Interleukin-6,白细胞介素-6)的蛋白表达;QPCR(Real-time quantitative PCR detecting system,实时定量基因扩增荧光检测系统)分析Nrf2[Nuclear factor(erythroid-derived 2)-like-2 factor,核因子红系2相关因子2]、HO-1(Heme oxygenase-1,血红素加氧酶1)、TNF-α、IL-1β和IL-6的基因表达水平;WB(Western blotting,蛋白质免疫印迹)分析肝脏组织中的p65、p-p65、p-IκBα、Nrf2、HO-1的蛋白水平;采用HIC(Immunohistochemistry,免疫组织化学)法观察肝脏细胞中p65的表达情况。3.采用70%乙醇溶液对金花茶叶进行提取,应用多种不同溶剂系统与色谱分析方法对金花茶叶提取物进行分离,根据物理化学性质性,并依靠1H-NMR,13C-NMR,ESI-MS等谱学数据分析及与标准品对照鉴定等方法对分离得到的化合物进行结构鉴定。结果:1.CPE中多酚和总黄酮含量分别为34.474±1.026和15.228±0.422 mg/g生药量。2.CPE(80和160 mg/kg)能够有效减轻由CCl4引起组织学的改变,包括坏死、炎症细胞浸润及脂肪变性等;能够降低由CCl4引起的血清和肝组织中的AST、ALT、MDA含量的增加(p<0.05);减少大鼠血清中的促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平以及抑制肝脏中调控这些促炎因子的关键蛋白p65、p-p65、p-IκBα的表达(p<0.05)。同时,CPE(80和160 mg/kg)能够增加肝组织中抗氧化酶SOD、GSH的表达(p<0.05),并且上调肝脏中Nrf2和HO-1蛋白的表达。3.从金花茶叶70%乙醇提取物中共分离并鉴定了7个化合物结构。这些化合物的结构包括:1个甾醇类化合物β-谷甾醇(β-sitosterol)(1),1个香豆素类化合物伞形花内酯(umbelliferone)(2),4个黄酮类化合物槲皮素(quercetin)(3)、山奈酚(kaempferol)(4)、表没食子儿茶素[(-)-epigallocatechin](5)、表儿茶素[(-)-epicatechin)](6),1个酚酸类化合物:绿原酸(chlorogenic acid)(7)。这些化合物中,酚类化合物如黄酮类及酚酸类可以成为对照品,为金花茶产品建立质量标准提供对照品。结论:CPE对CCl4诱导的ALI大鼠具有良好的护肝活性,可能与酚类及及总黄酮含量丰富有关。从CPE中等极性部位中分离并鉴定得到7个化合物。本实验的研究结果为金花茶作为一种护肝功能食品或药物的科学开发与利用提供前期科学实验依据和中等极性化学对照品。
其他文献
目的越来越多的研究证据表明,肝脏特异性长链非编码RNAs(long non-coding RNAs,lncRNAs)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的发生发展进程中发挥重要作用。本研究主要探讨肝脏特异性lncRNA FAM99B在HCC中的表达水平、临床意义及其生物学功能;同时,利用生物信息学方法预测FAM99B在HCC中的潜在分子机制。方法1.肿瘤基因组图谱
目的:RNA结合蛋白IGF2BP3被报道在多种肿瘤中异常表达,并能通过m6A调节的方式影响肿瘤细胞的命运。本课题通过免疫组化技术,细胞分子实验结合RNA测序和RNA甲基化测序研究IGF2BP3在膀胱癌中的作用和初步机制。方法:(1)利用TCGA膀胱癌基因表达数据和生存数据筛选出m6A相关的RNA结合蛋白IGF2BP3;利用免疫组化和q RT-PCR检测IGF2BP3在组织中的表达水平。(2)应用C
目的:探讨体外冲击波联合高压氧治疗四肢骨不连的临床疗效,证实高压氧对体外冲击波治疗骨不连的协同促进作用,并能提高治疗有效率,为治疗骨不连探索安全无创、疼痛轻、并发症少和恢复快的治疗方式。方法:根据患者自愿选择原则,将40例四肢骨折骨不连患者分为A、B两组,每组20人,A组予体外冲击波联合高压氧治疗,B组予体外冲击波治疗,定期随访,于治疗前及治疗结束后第1、2、4、8周检测两组患者血清中BMP-7和
目的:锰是维持机体功能的人体必需微量元素,环境中长期接触或者职业过量锰暴露均会扰乱正常细胞功能,导致氧化应激、线粒体功能障碍、自噬调节紊乱,损害正常的神经功能并引起神经退行性疾病。自噬是真核细胞内高度保守的生命进程,自噬可以清除细胞内错误折叠的蛋白质与受损的细胞器等,维持机体内环境的稳态,自噬异常与神经退行性病变密切相关。mTOR(Mammalian target of rapamycin,哺乳动
目的:观察单一肠内营养(exclusive enteral nutrition,EEN)联合糖皮质激素治疗中、重度克罗恩病患者的临床治疗效果。方法:选取广西医科大学第一附属医院2017年8月~2019年12月收治的中、重度克罗恩患者84例,随机分为激素治疗组37例,EEN联合激素治疗组47例,每组患者均使用糖皮质激素治疗,联合治疗组在此基础上使用单一肠内营养治疗。研究时间为6周,评价两个组患者治疗
目的:本文主要研究系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)合并肺动脉高压(Pulmonary arterial hypertension,PAH)患者的临床特点、相关危险因素及预后的影响因素,为SLE-PAH的诊治和病情评估提供依据。方法:回顾性查询2012年1月1日至2019年1月1日在广西医科大学第一附属医院住院治疗的3888例系统性红斑狼疮患者的资料
目的:肿瘤浸润免疫细胞是肿瘤免疫微环境的重要组成部分,近年来被视为与多种肿瘤的预后相关。但是,目前关于其在骨及软组织肉肉瘤中作用的报道仍较少见,本研究旨在探究肿瘤浸润免疫细胞在骨及软组织肉瘤患者中的浸润情况以及对预后的影响,从而探索一种新的肿瘤分型及预后评估系统。方法:本研究综合分析3个在线数据库(GEO、TCGA和TARGET)的基因芯片数据,免疫细胞浸润比例通过CIBERSORT算法计算。以计
目的:探讨广西地区血浆PCSK9的表达水平,及与2型糖尿病冠状动脉粥样硬化病变的关系。方法:研究对象均为在广西壮族自治区长期居住的无血缘关系的个体,父母均为壮族或汉族。回顾分析自2017年12月1日至2019年12月31日因胸痛、胸闷至广西医科大学第二附属医院住院并接受冠状动脉造影术(Coronary angiography,CAG)及化验检查的患者75例。入院后第二天抽取空腹静脉血,送本院检验科
背景与目的:肝癌是最常见的恶性肿瘤之一,患者生存率差,致死性高。射频消融治疗(Radiofrequency ablation,RFA)作为早期肝癌的一线治疗方案,极大的提高了患者的预后及生活水平。然而,相关研究发现,各种原因导致的RFA后肿瘤的残留是其较高复发率重要原因之一。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)可在多种层面通过调控基因的表达从而参与调控相关的生
目的:提高临床医师对原发骨髓淋巴瘤的认识。方法:回顾性分析1例原发骨髓滤泡性淋巴瘤患者的资料,介绍该患者的临床表现、实验室检查、诊断、治疗与疗效,并进行相关文献复习及讨论。结果:1.本例患者为女性,发病年龄65岁,以皮肤瘀点、瘀斑为首发表现。血常规显示血小板减少、淋巴细胞比例增高;体格检查及PET/CT检查未发现淋巴结、肝脾肿大及其他髓外浸润;骨髓细胞学可见成熟淋巴细胞增多,占57.5%;骨髓活检