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目的:研究发色多肽底物H-D-Chg-Ala-Arg-PNA?2HCl（CAAP）液相合成的主要条件,合成发色多肽底物并对其进行活性评价,为高效、经济的制备发色多肽底物提供依据。方法:（1）发色多肽底物的合成:精氨酸（Arg）与对硝基苯胺（PNA）的缩合选择以吡啶为溶剂、三氯氧磷为缩合剂的活化酯法;9-芴甲氧羰基（Fmoc）的脱除用50%哌啶/二氯甲烷溶液;丙氨酸（Ala）以及环己基甘氨酸（Chg）的缩合选择以二氯甲烷为溶剂、（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDCI）为缩合剂的碳二亚胺法;叔丁氧羰基（Boc）的脱除用HCl的丙酮溶液。（2）发色多肽底物的HPLC分析:以进口发色多肽底物为标准品对HPLC分析方法中的流动相、三氟乙酸含量、流动相体积、波长等方面进行选择,确定合适的分析条件。在确定的HPLC分析条件下分别对合成发色多肽底物、进口发色多肽底物、某国产发色多肽底物进行分析,三者根据保留时间定性分析,根据面积归一积分法得到合成发色多肽底物的纯度,再通过进口发色多肽底物绘制标准曲线,计算合成发色多肽底物的得率。（3）发色多肽底物的活性评价:将发色多肽底物加入酶促反应系统中,用紫外可见光分光光度计在405nm波长处检测吸光度单位时间变化值（ΔA/t）,依此来评价发色多肽底物的反应活性,ΔA/t越大,发色多肽底物活性越高。结果:（1）通过活化酯法和碳二亚胺法得到了发色多肽底物,为淡黄色的水溶性固体,主要合成条件为:1)Fmoc-Arg（Boc）2-OH与PNA的缩合采取以三氯氧磷为缩合剂、吡啶为溶剂的活化酯法:吡啶（mL）与反应物（mmol）比为3:1,在-15-10℃下反应40 min;2)Fmoc保护基的脱除用50%哌啶/二氯甲烷溶液反应30 min;3)Fmoc-Ala-OH以及Boc-D-Chg-OH的缩合选择以EDCI-HOBt为缩合剂、二氯甲烷和N,N-二甲基甲酰胺为溶剂的碳二亚胺法:在-50℃条件下将氨基酸底物一次性活化30 min后再用EDCI-HOBt缩合,羧基组分、氨基组分、EDCI-HOBt的摩尔比为为1.5:1:1.5,二氯甲烷和N,N-二甲基甲酰胺体积比为7:1,反应8 h;4)Boc保护基的脱除用HCl的丙酮溶液反应30 min。（2）发色多肽底物的HPLC分析结果:合成发色多肽底物保留时间为9.357 min,进口发色多肽底物标准品保留时间为9.316 min、某国产发色多肽底物保留时间为9.415 min,三者的保留时间较一致。合成发色多肽底物目标峰较明显,经面积归一积分法分析合成发色多肽底物的纯度为34.7048.95%,经标准曲线计算得到合成发色多肽底物的得率为1520%。（3）发色多肽底物的活性评价结果:合成发色多肽底物、进口发色多肽底物、某国产发色多肽底物30150 s内吸光度单位时间变化值分别为0.0045 s-1、0.0052 s-1、0.0031 s-1。结论:（1）通过液相合成法得到了的水溶性的发色多肽底物,经HPLC和酶解反应鉴定为凝血酶发色多肽底物,纯度为34.7048.95%,得率为1520%。（2）初步建立的合成路线为:1)Fmoc-Arg（Boc）2-OH与PNA的缩合以三氯氧磷为缩合剂、吡啶为溶剂;2)Fmoc保护基的脱除用50%哌啶/二氯甲烷溶液;3)Fmoc-Ala-OH以及Boc-D-Chg-OH的缩合以EDCI-HOBt为缩合剂、二氯甲烷和N,N-二甲基甲酰胺为溶剂;4)Boc保护基的脱除用HCl的丙酮溶液。（3）合成发色多肽底物与凝血酶反应活性要高于某国产发色多肽底物,但不及进口发色多肽底物。