研究目的：
　　氢溴酸槟榔碱（Arecoline Hydrobromide,AH）是从植物槟榔果实中提取出的一类生物碱。氢溴酸槟榔碱生物性质活泼，因此在药用方面，研究者将其制成了中药单体氢溴酸槟榔碱。随着对生物碱类等大量天然药物的不断探索，生物碱对肿瘤的抑制作用越来越受到关注。有研究报道，槟榔碱能够降低上皮肿瘤细胞白细胞介素-6（IL-6）的水平，IL-6的过度表达会诱发基底细胞癌（Basal Cell Carcinoma,BCC）的发生。目前，针对肝癌的各类治疗手段都远不能缓解肝癌的发生发展，氢溴酸槟榔碱对肝癌细胞的影响还没有被报道过。本研究以人肝癌Hep3B细胞为研究对象，旨在探究：①氢溴酸槟榔碱对肝癌细胞增殖和凋亡的影响；②初步探索氢溴酸槟榔碱对肝癌细胞作用的潜在分子机制，为肝癌药物的临床应用提供新的思路与方向。
　　研究过程：
　　①采用不同浓度梯度的氢溴酸槟榔碱处理Hep3B细胞。细胞长到接近对数期时，根据接下来的实验要求，对其进行分皿传代，进行细胞计数，保证每一皿的细胞数量基本一致。然后放进细胞培养箱进行培养，待细胞长至接近70%的时候，吸掉原培养液，用PBS轻轻冲洗掉残余培养液，向培养皿中加入用培养液稀释好的相应浓度的氢溴酸槟榔碱，与Hep3B细胞共同孵育0小时、24小时以及48小时，通过倒置显微镜观察细胞形态的变化，并且将观察结果予以记录、拍照。
　　②利用CCK-8方法检测氢溴酸槟榔碱对Hep3B细胞增殖的影响，并计算出药物的半致死浓度（IC50）后筛选出合适的加药浓度以便进行后续的相关实验。
　　③采用流式细胞术检测不同浓度的氢溴酸槟榔碱对Hep3B细胞凋亡的影响。
　　④采用Western blot技术检测不同浓度氢溴酸槟榔碱处理Hep3B细胞后，凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达水平的变化。
　　⑤采用转录组测序技术分析氢溴酸槟榔碱处理Hep3B细胞后，凋亡相关基因以及凋亡相关通路的变化，为后续深入研究做好前期准备。
　　⑥采用流式细胞术，检测氢溴酸槟榔碱对Hep3B细胞周期的影响，以及采用细胞划痕和Transwell实验探究氢溴酸槟榔碱对Hep3B细胞迁移和侵袭的影响。
　　研究结果：
　　①随着药物浓度以及孵育时间的增加，肝癌Hep3B细胞增殖受到明显的抑制，终浓度为35ug/mL药物处理细胞48h后，与对照组和低剂量实验组相比，绝大对数细胞发生皱缩、漂浮和死亡现象。
　　②经过CCK-8方法的使用，与对照组进行有效比较时发现，氢溴酸槟榔碱在一定条件下可以对Hep3B细胞增殖起到控制作用，且呈时间和剂量依赖性。
　　③流式细胞术检测氢溴酸槟榔碱处理Hep3B细胞后发现，35μg/mL氢溴酸槟榔碱引起的细胞凋亡率明显高于低剂量组和对照组。
　　④根据Western blot结果显示，氢溴酸槟榔碱处理Hep3B细胞后，发现其能够抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达，但促凋亡蛋白Bax的变化则不明显。
　　⑤根据转录组测序结果，根据差异表达基因的注释与富集，筛选出10个与凋亡相关的差异表达基因。促凋亡的相关5个基因明显上调，而抑制凋亡的相关基因则明显下调。
　　⑥流式细胞术检测细胞周期发现，氢溴酸槟榔碱能够将Hep3B细胞周期阻滞在G2/M期；且氢溴酸槟榔碱能够在一定程度上抑制Hep3B细胞的迁移和侵袭。
　　研究结论：
　　氢溴酸槟榔碱具有抑制肝癌Hep3B细胞增殖和诱导其凋亡的作用。