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研究背景：近年来，医源性感染已成为临床工作中一个突出问题，原因之一是体内医用植入物的广泛应用。尿路感染发病率仅次于呼吸系统感染，其主要危险因素有：留置导尿管、机体免疫力低下及大量使用抗生素，其中由于留置导尿管所引发的导尿管相关尿路感染(catheter-associated urinary tract infections，CAUTIs)是最常见的医院获得性感染，且感染率随留置时间延长而增加。一方面，长期大量使用抗菌药物，导致致病菌的耐药性增加；另一方面，生物被膜的存在使被膜内细菌逃逸抗生素的杀伤和机体免疫系统的清除，成为潜在感染源，使感染反复发作，给临床治疗带来困难。因此，本课题通过对CAUTIs细菌的研究，了解其菌群的分布和耐药特性，对指导临床合理用药，防治CAUTIs至关重要。有研究证实，粪肠球菌现已上升为医院内感染病原体的第三位，且易形成生物被膜。因此研究肠球菌相关基因与其生物被膜形成的关系以及群感效应系统(Quorum sensing, QS)通过调控这些基因从而影响生物被膜形成，对寻找出QS对肠球菌生物被膜调控传导通路，深入确定可行药物靶点和小分子物质，抑制生物被膜形成，解决实际临床难题，具有指导意义。目的：通过对导尿管相关尿路感染细菌培养，分离、纯化，鉴定，筛选出导尿管相关尿路感染的浮游菌和生物被膜菌，了解其分布，并通过对浮游菌和生物被膜菌耐药差异性的分析，进一步探讨导尿管相关感染的浮游菌和生物被膜菌的耐药特性。以筛选得到的生物被膜阳性粪肠球菌为研究对象，初探生物被膜粪肠球菌相关基因：明胶酶编码基因gelE、菌毛操纵子基因ebpA以及毒力调控器-fsr系统的fsrB基因与粪肠球菌生物被膜形成的相关性，为研究粪肠球菌群感效应系统调控生物被膜形成过程中的传导通路，抑制粪肠球菌生物被膜的形成提供一定的理论依据。方法：收集云南省大理学院附属医院泌尿外科2011年10月~2012年5月418例留置导尿管患者的导尿管标本，培养、分离、纯化、筛选并鉴定导尿管相关浮游菌及生物被膜菌，并通过对生物被膜菌的生物被膜半定量检测，了解导尿管相关感染浮游菌及生物被膜菌的分布。将上述收集到的经筛选、鉴定并确定为生物被膜菌与其同一病例标本中分离的相应同种浮游菌分为生物被膜菌组和浮游菌组。药敏试验分析生物被膜菌组和浮游菌组在普通MH培养基上的耐药特性，以及生物被膜菌组在普通MH培养基和泊洛沙姆(Poloxamer，F-127)培养基上耐药差异性。运用PCR技术对筛选得到的粪肠球菌浮游菌组和生物被膜菌组的gelE、ebpA、fsrB三种与粪肠球菌生物被膜形成相关的基因及其表达进行扩增，并通过SPSS11.0分别对其表达量进行统计学分析。结果：云南省大理学院附属医院泌尿外科418例留置导尿管患者的导尿管标本中，有219例发生感染，其感染率为52.39%；筛选出细菌共410株，其中浮游菌377株，经鉴定革兰氏阴性菌134株，革兰氏阳性菌243株；革兰氏阳性菌的葡萄球菌属(43.21%)和肠球菌属(41.15%)占大多数，革兰氏阴性菌只占浮游菌的35.54%，包括大肠杆菌、铜绿假单胞菌以及鲍曼不动杆菌。筛选出的生物被膜菌全部为革兰氏阳性菌，共33株。所试17种抗菌药物，33株生物被膜菌与其相应的浮游菌在普通MH培养基上药敏结果相似，无显著差异性(P>0.05)，而生物被膜菌组分别在普通MH培养基和泊洛沙姆(Poloxamer，F-127)培养基上的药敏结果，除了多西环素和头孢西丁的耐药性差异无统计学意义外(P>0.05)，其余药敏结果均有显著性差异(P<0.05)，且后者耐药性更强。21株粪肠球菌生物被膜菌组检测出gelE、ebpA、fsrB基因的阳性率分别是9.52%(2/21)，95.24%(20/21)，9.52%(2/21)；其相应的21株粪肠球菌浮游菌组检测出gelE、ebpA、fsrB基因的阳性率分别是85.71%(18/21)，9.52%(2/21)，90.48%(19/21)。21株粪肠球菌生物被膜菌组检测出gelE、ebpA、fsrB的表达量分别是浮游菌组的0.111(2/18)倍、10(20/2)倍、0.105(2/19)倍。由此可推断，gelE、ebpA、fsrB三种基因与粪肠球菌生物被膜的形成密切相关，且ebpA能够促进粪肠球菌生物被膜的形成； gelE、fsrB会抑制粪肠球菌生物被膜的形成。结论：云南省大理学院附属医院泌尿外科导尿管相关尿路感染的浮游菌在临床上以葡萄球菌、肠球菌属，大肠杆菌属为主，生物被膜菌以葡萄球菌、肠球菌属为主；生物被膜菌与浮游菌在体外耐药性未见显著差异，而生物被膜菌组在MH培养基和poloxamer培养基上存在显著耐药性差异，推测泊洛沙姆培养基有可能表现出生物被膜菌较真实的对药物的耐受情况，其耐受性更强。ebpA、gelE、fsrB三种基因与粪肠球菌生物被膜的形成密切相关。ebpA能够促进粪肠球菌生物被膜的形成，gelE、fsrB会抑制粪肠球菌生物被膜的形