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羊口疮（Orf）是一种急性、高度接触性传染病,对绵羊和山羊等小反刍经济动物健康养殖影响较大,引发该病的病原是羊口疮病毒（Orf virus,ORFV）。常规ORFV检测方法,如间接ELISA、PCR、细胞培养技术等,在Orf的流行病学调研、病原特性和病毒鉴定等方面的研究中发挥了极其重要的作用,但难以满足对感染组织器官和细胞中的ORFV抗原进行定位和直观判断的试验目的。间接免疫荧光（IFA）可特异、直观地检出组织细胞上的病毒抗原,在细胞水平对抗原进行定位,因此获得理化性状均一,结合抗原特异性强的ORFV的单抗,对于病毒的实验室研究和诊断等深入探究具有重要的价值。本研究以羊口疮疑似组织病料为材料,采用PCR、细胞培养技术等,对临床样品进行了检测和ORFV分离鉴定;以接种了ORFV的牛睾丸上皮细胞为检测标本,未经亚克隆化的ORFV杂交瘤细胞为材料,采用有限稀释法、间接免疫荧光试验（IFA）,筛选分泌抗ORFV单抗的杂交瘤细胞,并对其进行鉴定。ORFV阳性山羊口唇部组织,制备冰冻组织切片,用经过鉴定的ORFV单抗进行IFA试验检测。本研究获得如下结果:1.从临床羊口疮疑似病料中分离出了一株羊口疮病毒地方毒株,该毒株可在牛睾丸上皮细胞大量增殖,F7细胞毒在牛睾丸上皮细胞的TCID50为10-6.39/100μL;2.优化IFA检测羊口疮病毒抗体的条件为103.70 TCID50 ORFV接种牛睾丸上皮细胞培养42 h,荧光素标记的二抗1:400稀释;3.利用IFA方法筛选获得了2株单克隆杂交瘤细胞株,分别命名为C8和E8;4.C8分泌的单抗类型为IgG1,识别表位大小为100-130Ku;E8分泌的单抗类型为Ig2b,识别蛋白约为100ku;5.C8和E8杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体,均对ORFV感染的培养细胞的IFA呈现特异性阳性结果,其中C8的单克隆抗体对确诊Orf患羊的口唇部组织切片的IFA呈现特异性阳性结果。结论:1.成功分离了一株羊口疮病毒地方毒株;2.优化了IFA检测羊口疮病毒抗体的条件;3.获得了2株分泌抗ORFV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中1株细胞分泌的单克隆抗体可用于病料组织中ORFV的IFA检测。