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目的:本课题组前期通过基因芯片技术发现miR-664b-5p在哈萨克族食管鳞癌中表达显著升高,提示miR-664b-5p可能在哈萨克族食管鳞癌发生发展过程中起着重要作用。首先本研究在哈萨克族食管鳞癌组织中验证miR-664b-5p的表达,进一步在细胞水平探讨miR-664b-5p对食管癌细胞EC9706和TE-1生物学行为的影响。方法:(1)通过qRT-PCR检测miR-664b-5p在23例新疆哈萨克族食管鳞癌及30例哈萨克族食管炎福尔马林固定石蜡包埋组织中的表达,分析miR-664b-5p表达与哈萨克族食管鳞癌患者临床病理特征之间的关系。(2)在食管鳞癌细胞株EC9706和TE-1中转染miR-664b-5p模拟物与抑制剂以及其相应的阴性对照,qRT-PCR检测转染效率。通过CCK-8法和平板克隆形成实验检测miR-664b-5p对细胞增殖的影响;Transwell迁移和侵袭实验检测miR-664b-5p对细胞迁移和侵袭的影响;Western Blot检测miR-664b-5p对细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达的影响;流式细胞仪检测过表达miR-664b-5p对细胞细胞周期的影响。(3)通过Targetscan和miRDB数据库预测miR-664b-5p的靶基因,David网站在线分析预测靶基因的GO功能和KEGG通路,STRING网站与Metascape网站构建靶蛋白互作网络,利用Cytoscape的Cyto Hubba插件分析靶蛋白互作网络的核心分子。(4)分析哈萨克族基因芯片中预测靶基因m RNA与miR-664b-5p表达的相关性,通过qRT-PCR检测过表达miR-664b-5p后预测靶基因的表达。结果:(1)与哈萨克族食管炎组织相比,miR-664b-5p在哈萨克族食管鳞癌组织中表达升高(P<0.05),miR-664b-5p的表达与肿瘤分化程度相关(P<0.05)。(2)miR-664b-5p的过表达抑制了食管鳞癌细胞EC9706和TE-1细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭,促进细胞的凋亡,诱导细胞发生G1期阻滞,而抑制miR-664b-5p的表达则促进了EC9706和TE-1细胞的增殖、迁移和侵袭,抑制细胞的凋亡(P<0.05)。(3)GO分析结果显示miR-664b-5p靶基因的分子功能主要富集在蛋白质结合,生物学过程富集在基因表达的调控,KEGG通路分析显示靶基因主要富集在癌症通路,蛋白互作网络分析显示PIK3R1、KDR、RAC1、FLT1、CRK位于靶蛋白互作网络的核心节点(P<0.05)。(4)基因芯片结果显示哈萨克族食管鳞癌中miR-664b-5p与CCNE2、CDK6表达呈正相关(P<0.05),qRT-PCR结果显示,在EC9706和TE-1细胞中过表达miR-664b-5p后,CCNE2 m RNA表达显著降低(P<0.05)。结论:(1)miR-664b-5p在哈萨克族食管鳞癌组织中的表达高于哈萨克族食管炎组织,其表达与肿瘤分化程度相关。(2)miR-664b-5p抑制食管鳞癌细胞EC9706和TE-1的增殖,迁移和侵袭,诱导细胞凋亡,CCNE2可能是miR-664b-5p的靶基因。