【摘 要】
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CRISPR/Cas9技术是近年发展起来的基因定点修饰技术,它有制作简单、成本低、作用效果高等特点。精子载体法是生产转基因动物的一种简单有效的方法。本研究探讨将精子携带法和
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CRISPR/Cas9技术是近年发展起来的基因定点修饰技术,它有制作简单、成本低、作用效果高等特点。精子载体法是生产转基因动物的一种简单有效的方法。本研究探讨将精子携带法和CRISPR/Cas9技术结合,编辑獭兔的MSTN基因。本研究针对獭兔MSTN基因序列挑选2个靶位点,并设计出2对sgRNA,构建出2个MSTN基因编辑载体。然后将MSTN基因敲除载体和精子混合,再经过人工受精方法试图编辑獭兔的MSTN基因。结果显示:2个MSTN基因敲除载体构建成功,载体重要元件没有出现缺失。本试验进行人工授精的母兔32只。共有11只母兔怀孕,其中有3只母兔临产死亡。试验中生产出47只仔兔,其中有10只仔兔因母兔临产死亡导致没有存活,经过检测发现没有得到基因编辑的獭兔。利用精子携带法能将基于CRISPR/Cas9技术编辑獭兔MSTN基因存在不稳定性,本研究为进一步获得MSTN基因编辑獭兔进行了探索,获得了宝贵经验。
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