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第一部分原发性甲状旁腺功能亢进症的外周血白细胞microRNA表达谱背景原发性甲状旁腺功能亢进症（primary hyperparathyroidism,PHPT）是因甲状旁腺本身病变导致分泌过量甲状旁腺素的全身性疾病,病理类型多为良性的腺瘤（parathyroid adenoma,PA）,少数为增生及恶性的腺癌（parathyroid carcinoma,PC）。PC患者术后复发及死亡率高,然而术前鉴别PA及PC仍十分困难。多发性内分泌腺瘤病 1 型（multiple endocrine neoplasia type 1,MEN1）是最常见的遗传性 PHPT。microRNA（miRNA）是一类单链非编码小分子RNA,对基因进行转录后调控。外周血白细胞miRNA可作为分子标志物指导病理分型、预后等。目的1.寻找与散发性 PA、PC 以及 MEN1 相关的 PHPT（MEN1 related PHPT,MHPT）发病相关的外周血白细胞miRNAs。2.寻找有助于术前鉴别PC与PA的外周血白细胞miRNAs分子标志物。对象与方法1.研究对象:北京协和医院内分泌科确诊的22例散发性PA、14例散发性PC及16例MHPT患者。年龄、性别与PA组匹配的23例正常对照（normal control,NC）。2.研究方法:（1）遗传分析:提取研究对象的外周血细胞总RNA和总DNA。应用Sanger测序对散发性PHPT患者进行MEN1基因、CDC73基因、CaSR基因、CDKN1B基因以及RET基因突变分析,排除遗传性PHPT。筛查MHPT患者的MEN1基因突变。（2）1iRNA表达谱分析:应用Affymetrix miRNA 4.0芯片（含2578个人成熟miRNA）分析各组中性别、年龄相匹配的6例对象的外周血白细胞miRNA表达谱,得到组间差异miRNAs（P<0.05,差异倍数>1.5或<-1.5）。使用GCBI平台进行生物信息学分析。（3）结果验证:应用实时定量PCR（quantitative real time PCR,qRT-PCR）在22例PA、14例PC、16例MHPT患者以及23例NC中验证候选miRNAs的表达水平。结果1.PA组与NC组相比:①芯片:共有45个差异表达的miRNAs（同时满足Q<0.05）,差异倍数在-3.259～2.818之间。②qRT-PCR验证:挑选14个miRNAs进行验证,PA组let-7e-5p、let-7f-5p及has-miR-1260b的表达水平显著升高,分别为NC 组的 3.01 倍（P=0.028）、2.60 倍（P=0.031）及 1.98 倍（P=0.043）;miR-98-5p的表达在PA组呈上调趋势,为NC组的2.49倍（P=0.068）。2.PC组与NC组相比:①芯片:共有37个差异表达的miRNAs,差异倍数在-3.309～2.447之间。②qRT-PCR验证:挑选10个miRNAs进行验证,PC组的miR-4646-5p、miR-5196-5p 及 miR-6757-5p 的表达分别是 NC 组的 1.73（P=0.035）倍、1.84 倍（P=0.033）及 1.58 倍（P=0.017）。3.PC组与PA组相比:①芯片:共有64个差异表达的miRNAs,差异倍数在-2.421～2.498之间。②qRT-PCR验证:挑选15个miRNAs进行验证,校正性别后,miR-3136-3p及miR-5088-5p的表达在PC组呈上调趋势（P=0.070及0.076）。通过二元Logistic回归将性别分别与上述两个miRNAs进行建模,得到的新变量PRE1及PRE2有助于术前鉴别PC与PA（曲线下面积:0.776,0.805）。4.MHPT组与NC组相比:①遗传分析:MHPT组中有10例携带MEN1基因突变。②芯片:共有30个差异表达的miRNAs,差异倍数在-2.614～2.244之间。③qRT-PCR 验证:挑选 7 个 miRNAs 进行验证,MHPT 组 miR-1268b 及 miR-5194 的表达水平显著低于NC组,分别为NC组的38.85%（P=0.001）及56.63%（P=0.004）。结论本研究首次探讨了 PHPT的外周血白细胞的miRNA表达谱。与正常对照相比,PA 组的 let-7e-5p、let-7f-5p 及 has-miR-1260b 的表达显著升高,PC 组的 miR-4646-5p、miR-5196-5p 及 miR-6757-5p 的表达显著升高,MHPT 组的 miR-1268b 及 miR-5194的表达显著降低。这些异常表达的miRNAs可能有助于未来深入研究PHPT的发生、发展机制。miR-3136-3p及miR-5088-5p有望成为术前鉴别良恶性甲状旁腺肿瘤的分子标志物之一,但需要更大的样本量研究进行验证。第二部分多发性内分泌腺瘤病1型相关的甲状旁腺肿瘤p27Kip1及β-连环蛋白的表达目的分析p27Kip1及β-连环蛋白（β-catenin）在多发性内分泌腺瘤病1型（multiple endocrine neoplasia type 1,MEN 1）相关的原发性甲状旁腺功能亢进症（primary hyperparathyroidism,PHPT）肿瘤组织中的表达,以探索其在MEN1相关的甲状旁腺肿瘤发病机制中的作用。方法收集2002年至2013年北京协和医院收治的31例MEN1相关的PHPT（MEN1 related PHPT,MHPT）患者的31份甲状旁腺肿瘤组织以及5份正常甲状旁腺（normal parathyroid,NP）组织的石蜡标本,应用免疫组织化学染色法检测p27Kip1及β-catenin蛋白的表达情况。结果MHPT肿瘤组织中,p27Kip1在细胞核表达为缺失、弱阳性或中等阳性（比例分别为12.9%、32.3%、54.8%）;细胞膜β-catenin表达为强阳性或中等阳性、细胞质β-catenin表达为中等阳性或弱阳性,未见有β-catenin表达于细胞核。MHPT组织p27Kip1表达水平显著低于NP组织（P=0.001）,但细胞膜及细胞质β-catenin的表达在MHPT组无显著性统计学意义（P值分别为0.087,0.357）。在MHPT组中,腺瘤亚组与增生亚组间p27Kip1与β-catenin的表达差异均无统计学意义。结论MEN1相关甲状旁腺肿瘤组织p27Kip1蛋白表达显著减少,而未发现β-catenin异位聚集于细胞核现象。