目的:观察芪黄保肾方对肾衰竭幼鼠肾脏组织配对盒基因2(Paired box2,PAX2)的表达的影响,探讨芪黄保肾方保护肾功能,延缓儿童肾衰竭的作用机制。对象:65只体重范围在80至120g的四周龄SD幼鼠,购置于哈尔滨医科大学附属二院动物实验中心。实验期间,所有幼鼠均在黑龙江中医药大学动物实验中心饲养。室温维持在22-24℃,相对湿度保持在(50-70)%,人工12h昼/夜循环照明。保持通风、安静,定期更换垫料,消毒实验动物笼具。动物自由饮水,普通饮食。所有食物及饮用水都由黑龙江中医药大学动物实验中心提供,所有食物都经过了严格的消毒。方法:按照随机分组法将这65只幼鼠随机分在5组:假手术组、模型组、虫草组、芪黄保肾方组(简称芪黄组)、芪黄保肾方+虫草组(即联合组)。每组单独饲养,采用单侧输尿管结扎术制作肾衰竭幼鼠模型,10%水合氯醛腹腔注射麻醉后,在左侧耻骨上切口,钝性剥离左肾下极寻到左输尿管,用4-0号丝线在左肾的输尿管上上下结扎两道,上一道丝线结扎在左肾下极,从两道结扎点中间剪断输尿管,造成输尿管的梗阻,然后给予逐层缝合关闭幼鼠腹腔。假手术组同期也进行两次手术,手术环境和方法同其余4个手术组,但每次打开腹腔后仅剥离脏被膜,关腹。第一次手术后第2天,对所有幼鼠进行灌胃:虫草组(1.2mg/g/d溶于等体积蒸溜水灌胃)。假手术组(等体积蒸溜水灌胃),模型组(等体积蒸溜水灌胃),芪黄保肾方组按芪黄保肾方4mg/g/d溶于等体积蒸馏水灌胃,联合组为4mg/g/d芪黄保肾方+1.2mg/g/d虫草菌丝粉溶于等体积蒸馏水灌胃。每天06:00和18:00各灌胃一次。每周据新测体重计算一次药量。在术后21天后每组处死10只,麻醉剖腹后用采血针在腹主动脉采血2-3ml,测血清中肌酐、尿素氮的含量,迅速摘下梗阻侧肾脏,观察其外观,生理盐水清洗干净后,取一半肾脏组织浸于10%福尔马林中固化,光镜观察病理学改变,免疫组化检测PAX2的表达。结果:1.与模型组比较,芪黄组、联合组及虫草组幼鼠一般状态较好,幼鼠体征均优于模型组。2.与模型组比较,芪黄组、联合组及虫草组幼鼠血清肌酐及尿素氮含量均低于模型组。其中联合组血清肌酐及尿素氮含量均优于其他各组。3.对梗阻侧肾组织的光学显微镜观察:假手术组可见小球、肾小管间质未见增生。模型组(图2)可见部分肾组织肾小球呈现局灶性或全部硬化,本次实验以小球系膜细胞及基质重度增生,球基底膜增厚,管扩张、萎缩,间质有大量炎性细胞浸润,同时伴有纤维组织增多,间质呈现纤维化。虫草组(图3)及芪黄组(图5)小部分肾小球局灶性硬化,部分肾组织小管有扩张、系膜轻度增生,轻度间质纤维化,伴炎症细胞浸润。联合组(图4)表现在间质细胞轻度增生,部分小管扩张,管壁变薄,少量炎症细胞浸润。4.与模型组比较,免疫组化半定量分析显示芪黄组及虫草组、联合组肾小管PAX2的表达均少于模型组。且联合组(图10)下调PAX2蛋白的表达最明显。结论:1.芪黄保肾方能够改善肾衰竭幼鼠的生存状态。2.芪黄保肾方能够改善肾衰竭幼鼠的肾功能。3.芪黄保肾方能够减轻肾衰竭幼鼠肾脏病理损害,降低肾小管的损害,起到拮抗肾间质纤维化的作用。4.芪黄保肾方能够下调肾衰竭幼鼠肾组织PAX2的表达,使细胞外基质成分合成减少,减缓肾间质纤维化的发展,推测其可能为芪黄保肾方防治肾衰竭的作用机制之一,可为临床治疗儿童肾衰竭提供依据。