【摘 要】
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目的探索大鼠骨髓内皮祖细胞(EPCs)的分离、培养、诱导分化及鉴定方法，为实验研究和临床应用搭建平台。方法冲洗大鼠骨髓腔，梯度密度离心法获得单个核细胞，内皮系细胞专用培养液
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目的探索大鼠骨髓内皮祖细胞(EPCs)的分离、培养、诱导分化及鉴定方法，为实验研究和临床应用搭建平台。方法冲洗大鼠骨髓腔，梯度密度离心法获得单个核细胞，内皮系细胞专用培养液EGM-2MV培养，通过观察细胞形态学、增殖活性、内皮细胞系列标志CD34、VEGFR-2、vWF免疫组化，祖细胞标志CD133免疫荧光技术动态鉴定，激光共聚焦显微镜观察其摄取DIL-AC-LDL，结合FITC-Lectin-UEA-1实验，透射电镜观察超微结构和内皮细胞特征性细胞器以及染色体核型分析进行安全性评价。结果新分离的骨髓单个核细胞(BMMNCs)呈圆形，大小不一，48h后部分细胞开始贴壁，形态有梭形、三角形、纺锤形或不规则形，4～8d出现细胞集落和细胞线状排列，第9～11天接近融合，呈典型鹅卵石样外观。细胞生长曲线呈“S”形，8天和10天的增殖活性强于5天和14天。贴壁细胞CD34、VEGFR-2、vWF、CD133均表达阳性并呈动态变化，能够摄取DIL-AC-LDL和结合FITC-Lectin-UEA-1，透射电镜可见特征性的Weible-Palade(W-P)小体存在，能稳定保持二倍体核型。结论本实验初步建立了一套大鼠骨髓血管内皮祖细胞分离、培养、诱导分化及鉴定方法体系。
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