本实验从淮安市水产养殖基地采集土样,通过实验筛选土分离出76株芽孢杆菌。将分离的芽孢杆菌筛选出一株对鰤鱼诺卡氏菌拮抗效果最好的菌株JCL16。以鰤鱼诺卡氏菌为指示菌,检测菌株JCL16发酵液抑菌直径为17.1±0.3 mm,过滤完全除去菌体细胞的样品抑菌直径为15.8±0.4 mm,说明其抑菌活性与菌体细胞和次生代谢产物有关。通过高效液相色谱质谱联用分析,检测出JCL16菌株中次生代谢产物为表面活性素、溶杆菌素和Subtilosin A,产量分别为表面活性素纯品18 mg/L、溶杆菌素纯品14 mg/L、Subtilosin A纯品10 mg/L。对病原菌的抑菌圈直径分别为10.1±0.3 mm、14.7±0.5 mm、10.4±0.3 mm。通过实验发现不同比例混合的三种次生代谢产物抑菌圈直径均高于单一代谢产物,通过最低抑制浓度验证三种次生代谢产物对拮抗病原菌有协同增效作用。通过将携带转座子Tn YLB-1的穿梭载体p Mar A随机转入JCL16菌株中,构建突变体库。p Mar A质粒平均转化效率为3.17x10^-8,平均转座效率为95.1%。以鰤鱼诺卡氏菌为指示菌,对2000株突变株进行筛选,筛选结果为抑菌活性提高的有180株;降低的有650株;抑菌圈直径基本不变的有1170株。在抑菌活性显著变化的40株中,抑菌圈直径提高30%以上的有21株,降低50%以上的有19株。将抑菌圈直径最高的突变株命名为H5,H5表面活性素产量为24 mg/L。