集胞藻PCC 6803中短链醇耐受相关的反式编码小RNA Nc117调控机理解析

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蓝细菌Synechocystis sp.PCC 6803是仅需太阳能、CO2和水就能够生长的原核微生物,作为光合细胞工厂其已经能够合成多种生物燃料。但是蓝细菌底盘细胞对生物燃料毒性的低耐受性限制了其生产这些生物燃料的潜力和工业应用的可行性。为了探究蓝细菌中与生物燃料胁迫响应相关的调控元件,在我们之前的小RNA分析中,发现一个反式编码的小RNA Nc117参与了Synechocystis sp.PCC6803对乙醇和1-丁醇的耐受性。然而,其作用机制尚待确定。在本研究中,首先对小RNA Nc117进行了功能表征。简言之,我们利用3’RACE确定了小RNA Nc117的确切长度为102个核苷酸,并进一步证实了Nc117对短链醇耐受性的正调节作用。然后,结合计算机靶标预测和转录组学分析,探讨了Nc117的潜在靶标。通过比较转录组学分析,与野生型相比,Nc117过表达株共鉴定出119个上调基因和116个下调基因,其中5个基因的上游区域与计算机靶点预测的区域相一致。通过对短链醇胁迫下基因缺失和过表达菌株的表型分析,确定了一个编码D-甘油-α-D-甘露庚糖-1-磷酸鸟苷基转移酶的基因slr0007作为Nc117的潜在靶点,提示脂多糖或S层糖蛋白的合成可能是对醇类耐受性增强的原因之一。并且进一步的体内小RNA调控实验显示小RNA Nc117在转录后水平促进slr0006-slr0007操纵子m RNA更加稳定,从而起到调控作用。本文首次报道了反式编码小RNA对蓝细菌生物燃料耐受性的正调控作用,为蓝细菌中反式编码小RNA的调控机制提供了新的证据,也为合理构建高耐受性光合自养型底盘细胞提供了有价值的信息。
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