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研究背景:胆囊胆固醇结石病（胆石病）是普外科的常见病。多基因遗传因素引起肝肠循环胆固醇和胆汁酸代谢异常导致胆汁胆固醇过饱和、胆囊功能障碍以及胆汁中促/抗成核因子平衡紊乱三个病理生理改变进而促进结石形成是目前对胆石病发生路径的一个共识。尼曼匹克C1样1（Niemann Pick C1 like 1,NPC1L1）蛋白是机体参与胆固醇摄取的重要蛋白,在人体近端空肠和肝脏均表达。NPC1L1在近端空肠促进小肠上皮细胞摄取肠腔中的胆固醇;在肝脏,NPC1L1在胆小管侧膜表达,作用是促进肝细胞重吸收胆汁胆固醇而维持细胞内胆固醇含量的平衡。本课题旨在比较胆石病患者和无胆石人NPC1L1基因常见单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）分布差异,并在细胞水平研究不同多态性基因对NPC1L1转录表达表达的影响,揭示与胆石病的关系,并初步探索调节细胞内胆固醇水平对肝细胞凋亡和自噬的影响。材料和方法:采集25例胆囊结石患者外周静脉血,提取白细胞DNA,通过PCR方法扩增NPC1L1基因各个外显子并经测序鉴定序列,获取NPC1L1基因SNP的分布情况。采集299例胆囊结石患者和249例无胆石病人的外周静脉血,提取白细胞DNA,采用Taqman探针法检测NPC1L1中常见SNP的基因型和单体型的分布差异。利用双荧光报告基因法比较存在不同SNP位点的NPC1L1启动子的转录活性。分别采用依泽麦布抑制胆固醇摄取和辛伐他汀抑制胆固醇合成降低细胞内胆固醇含量观察对细胞凋亡和自噬的影响。结果:在25例胆石病患者DNA样本检测到4个NPC1L1基因的SNP位点:rs2073548（g.-762T>C）、rs17655652（g.-133T>C）、rs41279633（g.-18G>T）、rs2072183（g.1679C>G）,其基因和基因型频率分别如下:rs2073548（基因频率T=0.64,C=0.36,基因型频率CT=0.48,TT=0.40,CC=0.12）,rs17655652（基因频率T=0.98,C=0.02,基因型频率TT=0.96,CT=0.04）,rs41279633（基因频率G=0.98,T=0.02,基因型频率GG=0.96,GT=0.04）,rs2072183（基因频率C=0.62,G=0.38,基因型频率CG=0.44,CC=0.40,GG=0.16）。在胆石病组与无胆石病组人群中,rs2073548的C等位基因频率在胆石病组中高于无胆石病组（36.3%VS 30.5%,P<0.05）;rs2072183的G等位基因频率在胆石病组中高于无胆石病组（37.8%VS 31.5%,P<0.05）。合并本课题组前期研究结果再分析显示,rs2073548的C等位基因频率在胆石病组与无胆石病组间无显著性差异（35.9%VS 32.4%,P>0.05）;而rs2072183的G等位基因频率在胆石病组中依旧高于无胆石病组（38.8%VS 32.8%,P<0.01）;胆石组T-762/G1679单体型频率显著高于对照组（P=0.02）。双荧光报告基因检测显示:在NPC1L1基因启动子区,含rs2073548（g.-762T>C）T等位基因与C等位基因的启动子转录活性无显著性差异（P>0.05）,且其对辛伐他汀（Simvastatin）和依泽麦布（Ezetimibe）两种药物的反应亦无显著性差异（P>0.05）。辛伐他汀和依泽麦布抑制细胞内胆固醇含量,均可促进细胞凋亡。依泽麦布抑制NPC1L1基因增强自噬特异性蛋白LC3的表达。结论:本课题发现:1)NPC1L1基因rs2072183（g.1679C>G）多态性与胆石病发生有关,其G等位基因携带者和T-762/G1679单体型是胆石病危险因素。rs2073548（g.-762T>C）基因多态性不影响NPC1L1启动子的转录活性。2)抑制NPC1L1可增强细胞自噬。