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食用菌多糖作为一种生物活性成分,能够发挥降低血糖血脂、缓解炎症反应、调节肠道菌群等作用。荷叶离褶伞(Lyophyllum decastes)属于伞菌目、口蘑科、离褶伞属,是珍贵的药食两用真菌。目前,对荷叶离褶伞多糖(LDPS)消化特性及具体的生理活性研究较为缺乏。此外,越来越多的研究开始关注食用菌多糖与肠道菌群的相互作用,以及基于菌群调节的生物活性效应。因此,本研究以LDPS为对象,通过单因素与响应面试验优化LDPS提取工艺并分析其结构特性;通过构建体外消化和发酵模型,探讨LDPS体外消化发酵特性及与肠道菌群的相互作用;在体外试验基础上,构建结肠炎动物模型,研究LDPS对结肠炎的抑制作用及其机制。主要研究内容及结果如下:1、LDPS提取工艺优化及结构特性分析选取提取温度、提取时间、提取液料比、提取次数为影响因素,采用单因素及响应面优化试验,得到LDPS最佳提取工艺参数为:提取温度89℃、提取时间3 h、液料比30:1(mL/g)、提取2次时,多糖得率最大为5.35%±0.12%。LDPS理化分析结果显示,总糖含量为74.30%、蛋白质含量为6.63%、糖醛酸含量为57.06%、硫酸基含量为0.65%、多酚含量为1.10%。结合高效液相色谱与红外光谱法分析得到多糖平均分子量为1792.5±40.3 KDa,为β-构型多糖,由甘露糖、核糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖和岩藻糖8种单糖组成。其流变学特性研究表明多糖表观粘度随浓度增大而增大,随温度上升而降低;pH 3、pH 7、pH 9环境下多糖表观粘度较大;多糖表观粘度随NaCl浓度增大,表现为先增大后减小,NaCl浓度为0.1 M时,多糖表观粘度最大。2、LDPS消化特性与肠道微生态调节作用研究通过构建体外消化模型研究多糖在唾液、胃液和胃肠液中消化特性。结果表明,唾液与胃液消化过程中,LDPS分子量、消化液中还原糖及游离单糖含量均无显著变化,说明LDPS不受唾液及胃液消化影响。胃肠液消化过程中分子量大小无显著变化,无游离单糖生成,但消化6 h时,还原糖含量显著增加,说明此时多糖有轻微降解。通过建立人源化粪便体外厌氧发酵模型及利用高通量测序技术,研究LDPS与肠道微生物的相互作用。结果表明,随发酵时间延长,LDPS组发酵液pH值显著降低,多糖含量下降,还原糖及游离单糖含量均表现为先增大后减小,碳水化合物保留率下降,说明多糖进入结肠中被微生物分解利用。此外,LDPS显著降低Firmicutes/Bacteroidetes比例,显著增加Ruminococcus、Fusicatenibacter、Lactobacillus 的相对丰度。说明 LDPS对肠道菌群具有一定调节作用。3、LDPS对DSS诱导的结肠炎及肠道菌群的影响采用葡聚糖硫酸钠(DSS)构建C57BL/6结肠炎小鼠模型,研究低、中、高3种剂量(LLDPS 200 mg/kg/d、MLDPS 400 mg/kg/d、HLDPS 800 mg/kg/d)多糖溶液对结肠炎小鼠及肠道菌群的影响。结果表明,不同剂量LDPS均可缓解DSS引起的小鼠体重、饮水饮食量下降,同时显著抑制小鼠固体粪便质量降低,粪便血红素含量、疾病活动指数(DAI)上升,结肠缩短受损的现象,其中以MLDPS、HLDPS作用效果更优。通过qRT-PCR检测炎症因子及相关基因表达,发现MLDPS组可显著降低炎症因子含量与表达,显著提高紧密连接蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-1 mRNA表达。LDPS干预可恢复肠道菌群结构。LLDPS、MLDPS、HLDPS组中相对丰度显著增加的菌分别为,Butyricimonas、Romboutsia;LactobacillusjohnsoniiFI9785、Prevotellaceae;Lactobacillus animalis。此外,在科水平上 LDPS 可显著降低 Ruminococcaceae 和Deferribacteraceae的相对丰度。综合来看,LDPS可通过调节肠道菌群改善DSS诱导的结肠炎,然而具体的机制还需进一步研究。