论文部分内容阅读
目的:初步观察外源性NO对旋毛虫肌幼虫的杀伤作用和对旋毛虫肌幼虫细胞凋亡的诱导作用及其相关机制探讨。方法:取河南株旋毛虫感染的BALB/c小鼠肌肉组织消化,分离幼虫配制成悬液。48孔板中每孔加入虫体混悬液,再加入各组试剂,余下用不完全RPMI-1640培养液补充至1ml。各实验组SNP分别为0.02、0.05、0.10、0.20、0.50、1.00mmol/L;SNP+血红蛋白(Hb)0.15mmol/L、SNP+FeSO4 0.15mmol/L、SNP+L-cyst1.00mmol/L、SNP+FeSO4 0.15mmol/L + L-cyst1.00mmol/L,后4组SNP浓度均为1.00mmol/L,设空白对照组,每组重复3次,置37℃5%CO2培养箱中培养。在4天内连续每天观察,镜检虫体,计算第2、3、4天虫体死亡率。培养结束后收集虫体采用荧光(Hoechst 33342、碘化丙啶)双染法、HE染色和TUNEL法原位检测细胞凋亡,并用透射电镜观察杀伤后肌幼虫细胞凋亡变化,统计分析第4天各实验组对旋毛虫肌幼虫杀伤的差异。结果:1.在体外培养第2、3、4天,SNP0.02、0.05、0.10、0.20、0.50、1.00mmol/L组旋毛虫肌幼虫死亡率均高于空白对照组,且死亡率随SNP浓度上升、用药时间延长而升高。2.于培养第4天,除SNP0.02mmol/L组与空白对照组死亡率比较检验无统计学意义(P>0.05),SNP0.05、0.10、0.20、0.50、1.00mmol/L实验组与空白对照组死亡率比较检验均有统计学意义(P<0.05),SNP0.20 mmol/L与SNP0.50mmol/L实验组死亡率比较检验无统计学意义;加入不同抑制剂后,SNP1.00mmol/L实验组与SNP+Hb0.15mmol/L、SNP+FeSO4 0.15mmol/L、SNP+L-cyst1.00mmol/L、SNP+FeSO4 0.15mmol/L+L-cyst1.00mmol/L各实验组死亡率比较检验均具有统计学意义(P<0.05),SNP1.00mmol/L+Hb0.15mmol/L与SNP1.00mmol/L+FeSO4 0.15mmol/L +L-cyst1.00mmol/L实验组死亡率比较检验无统计学意义,SNP1.00mmol/L+FeSO4 0.15mmol/L与SNP1.00mmol/L+L-cyst1.00mmol/L实验组死亡率比较检验无统计学意义(P>0.05)。3.Hoechst33342和碘化丙啶双染,于不同浓度SNP实验组观察到发出强蓝、弱红荧光的死亡虫体;TUNEL法中在SNP1.00mmol/L实验组虫体切片中观察到散在单一分布染成棕褐色的凋亡细胞;透射电镜在SNP1.00mmol/L实验组肌幼虫切片中观察到较典型的凋亡细胞形态;HE染色法无法区别细胞凋亡与否。结论:外源性NO对旋毛虫肌幼虫具有杀伤作用,且这种作用在一定浓度范围内还存在剂量效应;外源性NO对旋毛虫肌幼虫细胞具有诱导凋亡作用;Hb、FeSO4、L-cyst对外源性NO的杀伤具有抑制作用。