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第一部分目的1.探讨空泡膜蛋白1在人乳腺浸润性导管癌和含导管原位癌成分的浸润性导管癌组织中的蛋白表达情况。2.初步阐述在人乳腺组织中空泡膜蛋白1的表达规律及空泡膜蛋白1的表达与预后的关系。方法随机抽取乳腺浸润性导管癌组织102例,其中32例为含导管原位癌成分。采用免疫组织化学方法检测空泡膜蛋白1在乳腺浸润性导管癌组织中的表达、定位,并与其它多个临床病理参数进行比较分析。全部数据由SPSS19.0统计软件完成统计学分析,X2检验用于定性资料间的比较,Spearman’s相关性检验用于变量间的相关性分析,Kaplan-Meier生存曲线进行生存分析,用log-rank检验分析生存曲线的差异。应用COX比例风险回归模型(Cox’s proportional hazards regression model,简称Cox模型)行多因素分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果1、免疫组织化学结果显示空泡膜蛋白1在乳腺组织中阳性着色部位为细胞质,细胞质中可见棕黄色颗粒着色,阳性率为57.8%,在乳腺浸润性导管癌组织中空泡膜蛋白1的表达与不同的肿瘤组织学分级(x2=12.644, P=0.002), pTNM分期(X2=11.987,P=0.001),淋巴结状态(P=9.341,P=0.002),肿物最大径(x2=7.630,P=0.022), NPI(x2=15.561,P=0.000)密切相关,差异有统计学意义。2、在32例含有导管原位癌成分的浸润性导管癌病例中,空泡膜蛋白1表达率在导管原位癌中比其旁的浸润性导管癌中要高,且差异有统计学意义(X2=4.433,P=0.035)。3、患者术后平均无病生存期81.2个月,五年总生存率为90.1%,无病生存率为81.3%。空泡膜蛋白1的表达对无病生存曲线分布有明显影响,我们的结果发现其中空泡膜蛋白1阴性表达的患者比阳性表达的患者预后差(x2=11.192,P=0.001),多因素分析显示空泡膜蛋白1是一个保护因素,相对危险度<1。结论空泡膜蛋白1蛋白在乳腺组织中表达,阳性表达部位均为细胞质,空泡膜蛋白1蛋白的表达率在导管原位癌中比浸润性导管癌组织中要高,此外我们的研究结果还显示浸润性导管癌组织中空泡膜蛋白1蛋白的表达具有较良好的估测预后价值,当空泡膜蛋白1阳性提示预后较好。第二部分目的探索中心体相关蛋白激酶2(NIMA-related kinase2,Nek2)的三个剪接异构体Nek2A, Nek2B,Nek2C在乳腺上皮恶性转化中的作用,并结合本课题组前期研究成果,进一步探讨乳腺癌早期诊断标志物及预后检测指标,并为研究癌前病变、早期癌变的基因治疗提供理论基础和实验依据。方法抽取简单模拟人乳腺癌多阶段发生、发展模式的四组乳腺组织石蜡标本：正常组织及一般性增生20例、不典型增生20例、导管原位癌20例和浸润性导管癌(非特殊型)20例,采用原位杂交的方法同时检测四组样本中三个剪接异构体的mRNA表达水平,并进行组间两两比较。加大上述四组标本量各至60例同时采用免疫组织化学方法检测Nek2B的蛋白表达、定位,并与其他多个临床病理参数进行比较分析。结果1、光镜下观察结果,可见导管上皮阳性细胞胞浆内呈均匀着色的淡黄色-棕／黄色颗粒,阳性细胞密集或(和)散在分布,乳腺正常组织和不典型增生组阳性率和强度小于导管原位癌和浸润性导管组,随着组织类型的恶性程度的增加,Nek2A、Nek2B、Nek2C mRNA表达的阳性率也呈逐渐上升趋势,正常导管上皮阳性率最低分别为(15.0%,20.0%,25%),发展到浸润性导管癌时达最高分别为(65.0%,65%,80%)。两两组间比较Nek2A, Nek2B,Nek2C mRNA表达水平：浸润性导管癌组明显高于正常乳腺组(P=0.002,P=0.004,P=0.000)和不典型增生组(P=0.006,P=0.009,P=0.004),导管原位癌组高于正常乳腺组(P=0.003,P=0.020,P=0.001)和不典型增生组(P=0.009,P=0.040,P=0.035)。不典型增生组高于正常乳腺组(P=0.637,P=0.786,P=0.461)、导管原位癌组和浸润性导管癌组均没有显著性差异(P=0.698,P=0.602,P=0.445)。2、组织阳性表达部位为细胞质,与正常乳腺组织相比,Nek2B蛋白的表达水平在导管原位癌和浸润性导管癌中增高(P=0.002,P=0.000),在浸润性导管癌组中,Nek2B的蛋白表达在不同的肿瘤大小(P<0.001),组织学级别(P=0.011),分子亚型(P=0.021)和ki-67(P=0.017)间差异有统计学意义。相关分析显示：在浸润性导管癌组织中,Nek2B蛋白的表达与组织学分级呈正相关(r=0.426,P=0.001)。结论1、在简单模拟乳腺癌多阶段发生、发展模式(正常乳腺上皮细胞→导管上皮不典型增生→导管原位癌→浸润性癌)中Nek2A、Nek2B、Nek2C mRNA的表达水平表现为逐步增加的趋势。2、在浸润性导管癌中Nek2B蛋白的表达与组织学分级呈正相关。Nek2B蛋白表达在导管原位癌组和浸润性导管癌组显著高于癌前病变组和正常组织组,说明Nek2B免疫组化结果可作为乳腺癌早期诊断的指标。