何首乌中磷脂类化合物的提取、分离及分析方法研究

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何首乌为蓼科植物(Polygonum multiflorum Thunb)的干燥块根,是一味较常用的滋补中药,用于治疗阴血枯,须发早白,筋骨不健等症,对动脉硬化、高血压、便秘患者更是大有益处。近年来的研究发现,何首乌中含有多种化学成分,其中蒽醌类、二苯乙烯苷类和磷脂类化合物等是较重要的几种。磷脂是首乌中的有效成分之一,可以防治肝功能损害,治疗心血管疾病等,具有较高的保健价值和药理作用。因此,开展首乌中磷脂类化合物的提取、分离及分析方法的研究,对深度开发利用此资源具有重要的应用价值及理论意义。本论文在查阅国内外文献的基础上,运用超声波提取、微波辅助萃取等技术,结合ICP-AES分析手段,系统地研究了何首乌中磷脂类化合物的提取工艺条件,同时建立了何首乌中磷脂类化合物新的分析方法,在薄层色谱分离的基础上,应用GC-MS分析技术,确立了何首乌中磷脂类化合物的侧链脂肪酸结构。其主要研究内容如下:1.采用超声波提取法提取中药何首乌中的磷脂类化合物,探讨了提取溶剂的种类及用量、提取时间、超声功率等因素对磷脂提取率的影响,并结合ICP-AES分析法对提取的磷脂类化合物进行测定。结果表明,对于1.5g何首乌,采用20mL氯仿—甲醇(2:1,V/V)溶剂,超声功率为24 kHz,提取35min的条件下磷脂提取率较高。2.应用微波辅助萃取技术对何首乌中的磷脂类化合物进行提取,系统研究了萃取溶剂的种类、固液比、萃取时间及萃取温度对磷脂萃取率的影响,确立了微波辅助萃取何首乌中磷脂类化合物的新工艺。结果得到的最佳工艺条件为:氯仿—甲醇(1:2,V/V)的混合溶液为萃取溶剂,固液比为1:20,在50℃萃取15min,提取的磷脂相对含量较高。3.建立了高效液相色谱法分析何首乌中磷脂类化合物的新方法。采用Nuclesil 100-5色谱柱(250×4.6mm i.d.,5μm),甲醇为流动相,流速0.8 mL/min,等度洗脱。蒸发光散射检测器的气体流速1.8 L/min,漂移管温度66℃,进样量15μL。四种磷脂类化合物的线性范围PG:0.0388-0.388 mg/mL(r=0.9991),PE:0.0500-0.250 mg/mL(r=0.9996),PC:0.0103-0.165 mg/mL(r=0.9995),LPC:0.0103-0.343 mg/mL(r=0.9995)。该方法应用于首乌中磷脂类化合物的分析,取得了较好的效果。4.系统研究了磷脂类化合物的薄层色谱分离条件。对磷脂酰胆碱(PC)、溶血磷脂酰胆碱(LPC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰丝氨酸(PS)和磷脂酰肌醇(PI)六种磷脂类化合物,以氯仿—甲醇—冰醋酸(5:2:1.5,V/V/V)为展开剂,单向展开8cm,即可得到较好的分离。在上述分离条件下对何首乌样品中的磷脂类化合物进行分离,得到PE一种化合物。结合GC-MS分析PE的脂肪酸侧链,结果发现,何首乌磷脂中PE的脂肪酸侧链组成为棕榈酸、油酸、亚油酸和硬脂酸。
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